0 閲覧数 • 2:30 分 • August 29th, 2025
細菌性レジオネラ・ニューモフィラ外膜小胞(OMV)に曝露された前処理マクロファージを含むマルチウェルプレートから始めます。
定義された細菌と宿主細胞の比率でレジオネラニューモフィラを添加して、OMV処理マクロファージに感染します。
インキュベーション中、マクロファージは膜結合ファゴソーム内の細菌を内在化します。
OMV 前処理はマクロファージのシグナル伝達を変化させ、ファゴソームの成熟を阻害します。
これにより、レジオネラ菌を含む液胞の形成が促進され、細菌が保護され、細胞内複製が可能になります。
界面活性剤を加えてインキュベートし、マクロファージを溶解します。これにより、細胞内細菌が培地に放出されます。
希釈したライセートを栄養豊富な寒天プレートにストライクします。
インキュベーション中に、細菌は成長し、目に見えるコロニーを形成します。
コロニーを数えて、生菌の数を表すコロニー形成単位(CFU)を決定します。
OMV処理マクロファージと未処理マクロファージのCFU数を比較します。
未処理のマクロファージと比較して、OMV処理された方のCFUが高いということは、OMVがマクロファージ内でのレジオネラ菌の生存を促進することを示しています。
細胞から培地を変更することなく、野生型L.ニューモフィラ株コアBで前処理または未処理のTHP-1細胞に感染するか、マウスBMDM細胞をこの株のべん毛欠損変異体で感染させること。
0.5のMOIで細菌を添加し、これはウェルあたり5番目のL.pneumophilaに10倍に相当します。培養物をそれぞれ24時間および48時間インキュベートします。細胞を溶解するには、最終濃度0.1%のサポニンを加え、細胞を5分間インキュベートします。
次に、BCYE寒天プレート上に必要な希釈液を50マイクロリットルストリークし、プレートを3日間インキュベートします。
形成されたコロニーを目で視覚的に数え、テキストプロトコルに従って計算を実行します。