マグネトスピリラム菌の増殖とその磁気移動性挙動の評価

マグネトスピリラムは、低酸素で繁殖する運動性細菌です。

これらは磁気双極子として機能する磁性ナノ結晶を生成し、地磁場を最適な酸素濃度に向けて移動するのに役立ちます。

マグネトスピリラムを培養するには、無酸素の液体培地を取ります。制御された量の酸素を注入して微好気性条件を確立し、細菌を加えてインキュベートします。

時間が経つにつれて濁りが増加し、細菌の増殖を示します。

半固体培養物を調製するには、低酸素ゾーンで無色になるピンク色の酸素指示薬を含む培地を使用し、酸素-無酸素界面(OAI)を最適な

酸素濃度

でマークします。

OAIに細菌を接種し、チューブを密封してインキュベートします。

バクテリアは増殖して、酸素が消費されるにつれて上向きに移動するバンドを形成します。

走磁挙動を評価するには、培養した細菌の吊り下げ滴を準備し、その近くに磁石を置きます。

顕微鏡下で、磁石に向かって方向性を泳ぐことと、磁石をひっくり返したときの動きの反転を観察します。

MSR-1、AMB-1、およびMS-1株を液体培地に接種するには、ストッパーにエタノールを塗布し、ブンゼンバーナーの炎に通して、酸素ボトルと新鮮な培地ボトルの上部を燃焼させます。

滅菌注射器と針を使用して、酸素ボトルから1ミリリットルの酸素を抽出し、新鮮な培地ボトルに移します。ガラス瓶で栽培された別の培養物からの接種物を使用する場合は、両方のボトルを燃やします。次に、1ミリリットルの古い培養物を新鮮な培地に接種します。

培養物を摂氏32度でインキュベートし、4〜7日後に新鮮な培地に接種します。MSR-1を酸素勾配の半固体培地に接種するには、新鮮な培地のチューブが、培地の表面から約1〜3センチメートル下のピンクから無色の界面によって具体化された、明確に定義されたOAIを示していることを確認します。接種物が別の酸素濃度勾配半固体培養物から来ている場合は、細菌によって形成されたバンドに無菌ピペットチップを置き、50マイクロリットルの培養物を吸引して細菌を収穫します。

これらの細菌を新鮮な培地のOAIにゆっくりと接種し、界面を乱さないようにします。チューブを密閉し、バクテリアを摂氏25度から摂氏30度の間で増殖させます。細菌が磁性とモーダル性の両方であることを確認するには、顕微鏡のカバースリップに培養液を一滴置きます。

カバースリップを裏返し、スライドガラスの上に置かれたOリングに取り付けます。ドロップが下部のスライドに触れないようにしてください。吊り下げられた液滴を顕微鏡下に置き、液滴の端に焦点を合わせます。

磁石の南極をその端の近くに置き、バクテリアが端に向かって泳ぐのを見てください。磁石をひっくり返して反対方向に泳がせます。