液体培養物からのStreptomyces venezuelae胞子の調製と単離

泉が入ったフラスコから始めて、 ストレプトミセス・ベネズエラ 菌のライフサイクル全体をサポートする栄養豊富な培地で満たされます。

細菌の胞子を培地に接種し、振とうしながらインキュベートして、適切な通気と栄養素の分布を確保します。

スプリングは混合を促進し、均一で一貫した成長をサポートします。

胞子は栄養素を吸収して発芽し、先端で伸びて菌糸に分岐し、菌糸構造に発達する胚管を生成します。

栄養素が限られると、生物は分裂して胞子、休眠中の生殖細胞を生成する特別な胞子形成菌糸を生成します。

位相差顕微鏡で観察し、菌糸体断片や胞子の存在を確認します。

培養物を遠心分離して、より重い菌糸体の破片をペレット化し、上清に軽い胞子を残します。

上清をマイクロチューブに移し、氷の上に置いて早期発芽を防ぎます。

胞子懸濁液を新鮮な培地で希釈し、さらに使用するまで低温条件下で保管します。

30ミリリットルの増殖培地に、画像化する S.ベネズエラ 株からの胞子10マイクロリットルを接種します。細胞の一貫した増殖と胞子形成のために、十分な通気を可能にするためにバッフルフラスコまたはスプリングを含むフラスコを使用してください。

細胞を摂氏30度、250RPMで35〜40時間培養します。準備ができたら、液体に取り付けられた位相差顕微鏡で菌糸体断片と胞子を確認できるはずです。1ミリリットルの培養物を卓上遠心分離機で400倍Gで1分間遠心分離し、菌糸体と大きな細胞断片をペレット化します。

次に、胞子の懸濁液を含む約300マイクロリットルの上清を新しい1.5ミリメートルのチューブに移し、チューブを氷の上に置きます。