抗生物質ストレス下における 緑膿 菌の群れ行動

印刷されたテンプレートに寒天プレートを置き、中央と6つの等間隔のサテライトスポットを揃えます。

プレートの中央に健康な 緑膿 菌培養物を見つけます。

同じ培養物と抗生物質の混合物をサテライトスポットに置きます。

光の反射を減らすために、プレートを黒い蓋で覆います。

細菌の増殖を維持するために、一定の温度と湿度のインキュベーター内のスキャナーに置きます。

中心にある健康な細菌は成長し、寒天表面全体に放射状に広がる巻きひげのような群れパターンで外側に広がります。

抗生物質と混合された細菌はストレスを受け、寒天を通って拡散する化学シグナルを放出します。

群れがこれらのゾーンに到達すると、ストレス信号を感知します。

これにより回避反応が引き起こされ、細菌の増殖が抗生物質にさらされた領域から遠ざかります。

タイムラプスイメージングは、抗生物質ストレス下での細菌の増殖と群れの拡大の変化を示します。

寒天の群れプレーティングの場合は、一晩緑 膿菌 培養物から5マイクロリットルを充填したP20ピペットチップを、1つの群れプレートの中心から2〜1/2センチメートル上の10〜45度の角度で持ち、プランジャーを最初の停止まで押し下げ、液滴のみで寒天に触れます。テンプレートを使用して、さまざまな群が寒天プレート全体にスポットを一貫して配置します。

抗生物質治療をプレートするには、30マイクロリットルの一晩培養した 緑膿菌 を目的の抗生物質の適切な濃度と量と混合し、皿の中心を中心に半径2.8センチメートルの同心円の6つの等距離のサテライト位置に抗生物質処理細菌6マイクロリットルを直ちに追加します。テンプレートを使用して、さまざまな群が寒天プレート全体にスポットを一貫して配置します。

すべての培養物がメッキされたら、透明なペトリ皿の蓋を特注の黒い蓋に交換します。湿度を75%に維持するために、摂氏37度に設定されたインキュベーター内のスキャナーに群がる寒天プレートを10リットルのウォーターバスで慎重に置きます。