ブリオパラ溶血性ビブリオ のスウォーマー細胞への分化の誘導

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細菌の増殖をサポートする溶融寒天培地から始めます。


鉄キレート剤を加えて遊離鉄を枯渇させ、培地にカルシウムを補給します。


培地を皿に注ぎ、固めてから乾燥させて残留水分を取り除きます。


鞭毛菌であるビブリオ・パラ溶血性菌のブロス培養を取ります。


液体培地では、細菌は鞭毛のある短い棒状のスイマーの形で存在します。


培養物をプレートにスポットし、乾燥させて細菌と表面の接触を促進します。


皿を密封してインキュベートし、細菌からの揮発性代謝副産物が蓄積できるようにします。


表面接触、鉄の制限、カルシウムの利用可能性、および蓄積された副産物は遺伝子発現を誘導し、これにより外側べん毛を含む細長いスウォーマー細胞への分化が引き起こされ、固体表面を横切る移動が可能になります。


群細胞は外側に拡大し、完全に分化した細胞で構成される群れフレアを形成し、分化が成功したことを示しています。


群がるプレートを作るための寒天溶液を調製するには、4グラムの心臓注入またはH.I.寒天粉末と100ミリリットルの二重蒸留水を懸浮させます。


H.I.寒天溶液を電子レンジで慎重に沸騰させ、粉末が溶けるまでボトルを時々振ってください。寒天溶液を摂氏121度で20分間オートクレーブし、寒天溶液を絶えず攪拌しながら摂氏60〜65度まで冷却します。次のステップでは、毒性の強い 2,2'-ビピリジルを扱うため、手袋と安全ゴーグルを着用する必要があります。


2,2'-ビピリジルを50マイクロモルの最終濃度まで添加します。塩化カルシウムを最終濃度4ミリモルまで添加します。少量の V.パラ溶血性 細胞を1つのコロニーの端から5ミリリットルのLBブロスに接種します。


培養物をシェーカーインキュベーターで摂氏37度で、600ナノメートルの0.8の光学密度に達するまでインキュベートします。これには通常約2〜3時間かかります。細胞培養が成長している間に、30〜35ミリリットルの最終H.I.寒天溶液を丸い150ミリメートルのシャーレにピペットで入れ、寒天を固めます。


細胞培養物を発見する直前に、寒天プレートを蓋を開けて摂氏37度で少なくとも10分間、または液体の残留物がなくなるまで直立して乾燥させますが、それ以上は乾かしません。H.I.寒天群れプレートの中心に1マイクロリットルの細胞培養物をスポットし、スポットを乾燥させます。気泡の形成やテープへの折り畳みを避けるように注意しながら、プレートを透明なプラスチックテープで密封します。


プレートを摂氏24度で一晩インキュベートします。これにより、このタイムラプスビデオクリップに示されているように、コロニーの中心から伸びる群れフレアを持つ V.パラ溶血性ス ウォームコロニーが形成されます。
 

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最終更新:29 8月 2026