0 閲覧数 • 3:55 分 • September 26th, 2025
細菌の増殖をサポートする溶融寒天培地から始めます。
鉄キレート剤を加えて遊離鉄を枯渇させ、培地にカルシウムを補給します。
培地を皿に注ぎ、固めてから乾燥させて残留水分を取り除きます。
鞭毛菌であるビブリオ・パラ溶血性菌のブロス培養を取ります。
液体培地では、細菌は鞭毛のある短い棒状のスイマーの形で存在します。
培養物をプレートにスポットし、乾燥させて細菌と表面の接触を促進します。
皿を密封してインキュベートし、細菌からの揮発性代謝副産物が蓄積できるようにします。
表面接触、鉄の制限、カルシウムの利用可能性、および蓄積された副産物は遺伝子発現を誘導し、これにより外側べん毛を含む細長いスウォーマー細胞への分化が引き起こされ、固体表面を横切る移動が可能になります。
群細胞は外側に拡大し、完全に分化した細胞で構成される群れフレアを形成し、分化が成功したことを示しています。
群がるプレートを作るための寒天溶液を調製するには、4グラムの心臓注入またはH.I.寒天粉末と100ミリリットルの二重蒸留水を懸浮させます。
H.I.寒天溶液を電子レンジで慎重に沸騰させ、粉末が溶けるまでボトルを時々振ってください。寒天溶液を摂氏121度で20分間オートクレーブし、寒天溶液を絶えず攪拌しながら摂氏60〜65度まで冷却します。次のステップでは、毒性の強い 2,2'-ビピリジルを扱うため、手袋と安全ゴーグルを着用する必要があります。
2,2'-ビピリジルを50マイクロモルの最終濃度まで添加します。塩化カルシウムを最終濃度4ミリモルまで添加します。少量の V.パラ溶血性 細胞を1つのコロニーの端から5ミリリットルのLBブロスに接種します。
培養物をシェーカーインキュベーターで摂氏37度で、600ナノメートルの0.8の光学密度に達するまでインキュベートします。これには通常約2〜3時間かかります。細胞培養が成長している間に、30〜35ミリリットルの最終H.I.寒天溶液を丸い150ミリメートルのシャーレにピペットで入れ、寒天を固めます。
細胞培養物を発見する直前に、寒天プレートを蓋を開けて摂氏37度で少なくとも10分間、または液体の残留物がなくなるまで直立して乾燥させますが、それ以上は乾かしません。H.I.寒天群れプレートの中心に1マイクロリットルの細胞培養物をスポットし、スポットを乾燥させます。気泡の形成やテープへの折り畳みを避けるように注意しながら、プレートを透明なプラスチックテープで密封します。
プレートを摂氏24度で一晩インキュベートします。これにより、このタイムラプスビデオクリップに示されているように、コロニーの中心から伸びる群れフレアを持つ V.パラ溶血性ス ウォームコロニーが形成されます。
本研究では、特定の環境条件下におけるVibrio parahaemolyticusのスウォーマー細胞への分化について探索します。このプロセスでは、細菌の増殖と移動を促進するために、寒天培地の成分および培養条件の操作を行います。
Vibrio parahaemolyticusをスウォーマー細胞へと分化誘導させることで、細菌の適応および運動メカニズムを精密に解析することが可能になります。これらは、疾患に関連する系における微生物の挙動を理解する上で極めて重要です。このワークフローは、感染症ポートフォリオにおける抗毒性および抗バイオフィルム戦略の初期段階のターゲット検証とメカニズム的なリスク低減を支援します。本手法は、細菌の表現型の基礎となる環境トリガーおよび遺伝子発現の変化を評価するための、再現性のあるプラットフォームを提供します。
本手法は、感染症研究における初期の仮説検証からアッセイ開発、さらには前臨床モデルの整合にいたるまでのディスカバリー・コンティニュアムに統合されます。
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最終更新:29 8月 2026