嫌気性細菌によるマウス膣コロニー形成のモデル化

膣環境を調整し、感染に対する感受性を高めるホルモンで治療された雌マウスを例にとります。

マウスが前足でケージをつかみながら尾を持ち上げて後肢を持ち上げ、膣口を露出させます。

膣内腔を嫌気性緩衝液ですすぎ、病原体に対する保護バリアである粘液、死んだ上皮細胞、および内因性膣微生物を洗い流します。

体液の損失を最小限に抑えるためにマウスを拘束しながら、嫌気性細菌病原体の懸濁液を膣に直ちに接種します。

同時接種の場合は、以前と同じ量を使用して別の嫌気性細菌病原体の懸濁液を投与します。

相互汚染を防ぐために、接種したマウスを未接種のマウスとは別に収容します。

接種後、細菌は膣上皮に付着し、コロニーに成長し、宿主の免疫応答に対するバリアとして機能する保護バイオフィルム層を形成します。

70マイクロリットルの滅菌嫌気性PBSをマウス番号で標識された1.5ミリリットルの微量遠心チューブにピペッティングすることにより、嫌気性チャンバー内の膣洗浄チューブを準備します。

チューブをしっかりと閉じて、チャンバーから取り出します。膣洗浄を行うには、まず、前足でつかむことができるケージの上にマウスを置きます。次に、尾の中央部分をそっとつかみ、後肢が少し高くなり、膣口が露出するように持ち上げます。

ラベル付き洗浄チューブから50マイクロリットルのPBSを引き出した後、ピペットチップを膣内腔に2〜3ミリメートル静かに挿入し、3〜4回ピペッティングしてPBSで洗浄します。次に、残りの20マイクロリットルの未使用PBSとともに、洗浄材料を元の洗浄チューブに戻します。この膣洗浄の直後に、20マイクロリットルの細菌懸濁液またはビヒクルコントロールを膣内に移すことにより、各マウスに接種します。

2つの異なる細菌株による同時接種実験では、事前に菌株を混合するのではなく、各細菌懸濁液を10マイクロリットルずつ個別に接種します。投与量が膣口ですぐに蓄積するのを防ぐために、マウスの後部を10〜20秒間保持し続けます。接種したマウスを新しいケージまたはすでに接種されたケージメイトに移し、他のマウスで手順を繰り返します。