トマトの細菌耐性をスクリーニングするための苗の洪水アッセイ

さまざまなトマト株の細菌耐性をスクリーニングするには、無菌条件下で栽培された生後10日のトマト苗から始めます。

これらの苗木は、本葉が生まれ、根が根が根を張っています。

両方の株に界面活性剤を混合した病原菌を氾濫させ、植物表面への接種物の均一な拡散を促進します。プレートを傾けて振り、苗と接種物の接触を最大化します。

余分な接種物を取り除き、プレートを再密封し、成長チャンバーでインキュベートします。

細菌は気孔から侵入し、葉細胞間の細胞外空間であるアポプラストにコロニーを形成します。

細菌は植物細胞にエフェクタータンパク質を注入して、植物の免疫応答を抑制します。

感受性菌株はこれらのエフェクターを検出できず、細菌の増殖と細菌毒素による植物組織の損傷を可能にします。

耐性株はエフェクターを認識し、活性酸素種を生成して細菌を殺します。

インキュベーション後、耐性株は持続的な成長を示しますが、感受性株は発達の停止を示します。

生後10日の苗の入ったプレートを成長チャンバーからバイオセーフティキャビネットに移し、サージカルテープを剥がします。次に、6ミリリットルの接種物を各プレートに移します。

ピペットチップで苗を接種物にそっと押し込み、3分間タイマーを開始します。両手にプレートを1つずつ持ち、プレートの前面を下に傾けて、苗の子葉と葉を沈めます。接種物を横に5〜7回振り、プレートを後ろに傾けて、接種物で根を覆います。

プレートを再び下に傾け、合計3分間サイクルを繰り返します。接種物をプレートから注ぎ、平らな面に置き、残りの接種物を2回目に注ぎます。プレートを再度包み、成長チャンバーに戻します。