乳酸菌の復活と増殖

酸素なしで増殖する嫌気性微生物である乳酸菌の冷凍グリセロールストックから始めます。

凍結すると細菌は寒さによるストレスにさらされ、細胞機能が低下します。

チューブをボルテックスして細胞を再懸濁させ、アリコートを栄養ブロスに移します。嫌気性条件下でインキュベートします。

この環境では、細菌は嫌気性代謝を通じてエネルギーを生成し、細菌の回復をサポートし、細胞活動を回復させます。

培養物を新鮮なブロスに移して、迅速な細胞分裂のための新たな栄養素を提供します。

活発に成長する細胞は培地を酸性化し、それらの回復と成長を示します。

寒天プレートに培養物を縞模様で取ります。嫌気性条件下でインキュベートし、細菌の増殖をサポートします。

代謝活性細胞は目に見えるコロニーを形成しますが、損傷した細胞や不活性な細胞は成長しません。

単離したコロニーを新鮮なブロス、ボルテックスに移し、嫌気性でインキュベートして、純粋で高性能な培養物を実現します。

この方法は、下流のアプリケーションのために生細胞を復元します。

調製した乳酸菌またはLAB株のグリセロールストックを、摂氏マイナス80度の超低温冷凍庫から2ミリリットルの遠心分離管に入れます。

使用前に解凍しないでください。使用前に遠心分離管の開口部を70%アルコールで洗浄・消毒し、優しくボルテックスしてください。遠心分離管から約250マイクロリットルのストックLAB培養物を新鮮な2ミリリットルのMRS試験管にピペットで移動させます。

試験管を穏やかに渦にし、パラフィルムを塗り、摂氏42度で一晩12〜16時間嫌気的にインキュベートします。次に、2ミリリットルのMRS試験管から新鮮な7ミリリットルのMRS試験管に一晩培養した培養物から約500マイクロリットルを取り、それらをボルテックスし、摂氏42度で12〜16時間嫌気的にインキュベートします。紫外線可視分光光度計で610ナノメートルでの培養物の光学密度または増殖を測定することにより、微生物の増殖を評価し、0.7〜0.9の間で許容可能な結果を記録します。

7ミリリットルのMRSチューブからMRSおよびMRCMPYR寒天プレートに一晩培養物をストリークし、摂氏42度で72時間嫌気的にインキュベートします。寒天プレートから単離されたコロニーをピックアップし、新鮮な7ミリリットルのMRS試験管に移し、穏やかにボルテックスし、摂氏42度で12〜16時間嫌気的にインキュベートします。単離株を含む寒天プレートを摂氏4度で冷蔵庫で1週間保管します。

次に、610ナノメートルの縞模様プレートから単離したLAB培養物の7ミリリットルMRS試験管から光学密度を測定・確認し、関連するすべての実験の作業培養物として使用します。