マイクロアレイスクリーニングによる細菌忌避ポリマーのハイスループット同定

複数のポリマースポットを持つ滅菌済みアガロースコーティングマイクロアレイスライドをマルチウェルプレートに入れます。アガロースは、非特異的な細菌の結合を最小限に抑えます。

混合細菌培養物をスライドに加え、穏やかに攪拌しながらインキュベートします。

細菌は、好ましいポリマースポットに結合する明確な接着タンパク質を分泌し、その結果、時間の経過とともに細菌の付着とコロニー形成が強化されます。

逆に、忌避ポリマーはタンパク質の吸着に抵抗し、細菌の付着を減少させます。

スライドをリン酸緩衝生理食塩水またはPBSですすぎ、緩く結合した細菌を除去します。

DAPIを添加して、表面に付着した細菌のDNAを染色します。

スライドをPBSで洗浄し、乾燥させ、粘着性カバーガラスで密封します。

スライドの外側表面をエタノールで滅菌します。

明視野画像をキャプチャして、ポリマースポットを特定します。次に、蛍光モードに切り替えて、ポリマースポットの蛍光を検出します。

蛍光の低下を示すポリマースポットは、細菌の付着が最小限であることを示し、細菌忌避ポリマーとして識別されます。

マイクロアレイ用の接種物を培養および調製した後、テキストプロトコルに従って、UV滅菌ポリマーマイクロアレイを長方形の4ウェルプレートに入れ、6ミリリットルの混合細菌培養物を加えます。プレートを摂氏37度で穏やかに攪拌しながら5日間インキュベートします。インキュベーション後、PBSを使用してマイクロアレイを2回穏やかにすすぎます。

次に、PBSにDAPIミリリットルあたり1マイクログラムを加え、30分間インキュベートします。次に、マイクロアレイを新しい4ウェルプレートに移し、マイクロアレイをPBSで覆い、穏やかに旋回させます。その後、PBSを一度交換し、洗浄を繰り返します。

すすぎ後、空気の流れの下でマイクロアレイを乾燥させ、シーリングフィルムを貼り付け、ガラスカバースリップをマイクロアレイスライドに貼り付けます。接着剤が乾いたら、70%エタノールを使用して外面を滅菌します。20倍の主観レンズを備えた蛍光顕微鏡を使用して、明視野およびDAPIチャネルの各ポリマースポットの単一の画像をキャプチャします。