ウイルス粒子生産のための ボレリア・ブルグドルフェリ 培養物の調製と誘導

病原性細菌である ボレリア・ブルグドルフェリの遺伝子組み換え株の培養から始めます。

この株は、抗生物質耐性を与える標的遺伝子を含むように操作された、ゲノムに組み込まれた休眠中のバクテリオファージDNAを運びます。

対応する抗生物質を加え、培養物をインキュベートします。抗生物質耐性遺伝子は、抗生物質を阻害するタンパク質を発現し、その遺伝子を保有する細菌のみが増殖するようにします。

培養物が所望の密度に達したら、細胞を遠心分離してペレット化し、上清を廃棄します。

ペレットを再懸濁し、化学誘導剤を導入し、インキュベートしてDNA損傷を誘導します。

結果として生じるDNA修復応答は、バクテリオファージDNAを切除し、その複製、構造タンパク質の発現、および抗生物質耐性遺伝子を運ぶ新しいビリオンの集合を開始します。

培養物を再度遠心分離し、上清を廃棄し、細胞を新鮮な培地に再懸濁します。

成熟したビリオンを含む細菌細胞は、さらなる下流への応用の準備ができています。

形質導入プロトコルのために、適切なボ レリア・ブルグドルフェリ ・クローン150ミリリットルを、しっかりとキャップされた滅菌円錐形遠心分離管内の15ミリリットルのBSKに接種します。次に、 ボレリア・ブルグドルフェリ ・クローン内の異種DNAの選択と維持のために、適切な濃度の抗生物質または抗生物質の組み合わせを培地に補充し、サンプルを摂氏33度でインキュベートします。培養物が成長したら、適切な量の培養物を6,000 Gで10分間遠心分離します。

上清をデカントした後、ペレットを新鮮なBSKで4ミリリットルに再懸濁し、最小限のヘッドスペースでサンプルを保持するために利用可能な最小の滅菌チューブにサンプルを移します。次に、4ミリリットルの培養量に基づいて推奨濃度に適切な量の誘導剤を加えてファージ産生を誘導し、チューブにしっかりとキャップをし、完全に混合します。サンプルを摂氏33度で2〜4時間インキュベートします。

次に、サンプルを 15 ミリリットルの遠心分離管に移します。サンプルを6,000 Gで10分間遠心分離します。上清をデカントした後、細胞ペレットを15ミリリットルのBSKに再懸濁します。