細菌の表面運動性を可視化するためのスウォーミングアッセイ

緑色の蛍光タンパク質を発現する運動性細菌を含むチューブから始めます。

針を使用して、細菌を柔らかい栄養寒天プレートにスポットし、細菌の表面運動性を研究します。

次に、寒天表面の結露を防ぐためにプレートを反転させます。

プレートをインキュベートして、細菌が増殖できるようにします。

インキュベーションが進むにつれて、細菌はべん毛を使用して接種ポイントから外側への移動を開始します。

インキュベーションが完了したら、蓋を開け、寒天側を光学検出器に向けるように、逆さまのプレートをイメージングシステムに入れ、正確なイメージングを確保します。

水を入れた蓋をプレートの上に置きます。湿気の多い環境を維持するために密閉してください。

イメージングシステムを閉じて、タイムラプス画像取得を開始します。

時間が経つにつれて、細菌の移動により、巻きひげと呼ばれる緑色の指のような突起が生成されます。これらの細菌構造は、中央の接種点から外側に伸びており、細菌の表面運動性を確認します。

細菌株に応じて、滅菌つまようじまたはワイヤー接種針で寒天表面を突いて、乾燥した群れ寒天プレートの上に1〜5マイクロリットルの一晩培養物を接種し、群アッセイプレートを摂氏30度、摂氏37度、または摂氏42度のいずれかに設定した温度でインキュベーターに移します。余分な水分が寒天ではなくプレートの蓋に凝縮するようにプレートを反転させ、タイムラプスイメージングの直前に2時間または4時間、菌株特異的温度で細菌を平衡化します。

次に、寒天表面の細菌がユニットの反転カメラに向かって下を向くようにプレートをin vivoイメージングユニットに移します。すべてのペトリ皿の蓋に少量の水を入れます。次に、水辺を上に向けて各蓋を逆さ寒天プレートの上に置きます。

イメージングユニット内で、イメージングエンクロージャーを密閉して一定の湿度レベルを維持し、イメージングユニットのイメージング設定を調整して、群れの活動のタイムラプスイメージングを開始します。リアルタイムイメージングの後、細菌の群れダイナミクスは、画像Jなどの標準的な画像解析を使用して分析できます。