巨大小胞内の細菌の単細胞培養

ビオチン化リン脂質を含むリン脂質で構成される支持膜でコーティングされたチャンバー付きスライドガラスから始めます。

二重層のビオチンに結合するニュートラビジンとインキュベートします。洗浄して余分なニュートラビジンを取り除きます。

巨大な小胞またはGVを含む栄養培地を導入します。各GVは、単一の細菌細胞をカプセル化する球形のミクロンサイズの脂質二重層小胞であり、限られた環境での個々の細胞の挙動を研究するためのモデルとして機能します。

ニュートラビジンはビオチン化GV脂質に結合し、小胞を支持膜に固定し、静的条件下で安定した長期観察を実現します。

チャンバーを密閉して水分補給を維持し、汚染を最小限に抑えます。

スライドを加熱台を備えた顕微鏡ステージに載せて、生理学的状態をシミュレートし、顕微鏡下で観察します。

培地からの栄養素はGVに拡散し、時間の経過とともに細菌の増殖をサポートします。

このセットアップにより、閉じ込められた小胞微小環境内での単一細胞細菌の増殖をリアルタイムで視覚化できます。

サポーター二層膜に巨大小胞を固定するには、外側の巨大小胞水溶液中の10マイクロリットルのニュートラビジンを穴に導入し、室温で15分間インキュベートします。

インキュベーションの最後に、200ミリモルのグルコースを添加した20マイクロリットルのLB培地で穴を2回穏やかに洗浄し、チャンバー内の穴に巨大な小胞溶液の全量を加えます。次に、18 x 18 ミリメートルのカバーガラスで穴を塞ぎます。巨大な小胞内の細菌の増殖を監視するには、倒立顕微鏡で40倍対物レンズを選択し、チャンバーを顕微鏡加熱ステージシステムに配置します。

次に、細菌細胞を含む巨大小胞をチャンバー内の静的条件下で摂氏37度で6時間インキュベートし、科学的な相補型金属酸化物半導体カメラを使用して、30分ごとに細菌細胞の増殖の画像をキャプチャして記録します。