JoVE 実験百科事典
微生物学
0 回視聴 • 3:13 分 • September 26th, 2025
抗生物質クロラムフェニコールに敏感な 黄色ブドウ球菌 培養物を取ります。
遠心分離機で細菌をペレット化し、上清を除去します。
ペレットを栄養制限培地を含むチューブに移し、インキュベートします。栄養ストレスは、外来DNAを内在化する細菌の能力である能力を高めます。
再度遠心分離し、上清を取り除きます。ペレットを新鮮な栄養制限培地に再懸濁します。
次に、クロラムフェニコール耐性遺伝子を保有する 黄色ブドウ球 菌株から抽出したDNAを加えます。インキュベート。
DNA 取り込み機構は DNA を一本鎖に処理し、細胞質に移し、そこで細菌染色体に統合します。
遠心分離して上清を除去します。ペレットを栄養豊富な培地に再懸濁します。
懸濁液をクロラムフェニコールを含む溶融栄養豊富な寒天培地に移します。
混合物を皿に注ぎ、インキュベートします。
クロラムフェニコール耐性コロニーの増殖は、DNA取り込みの成功を示しています。
レシピエント細胞を摂氏37度の5ミリリットルのTSBで振とうしながら一晩培養します。翌朝、0.5ミリリットルの一晩培養液を1.5ミリリットルのチューブに移します。
遠心分離により細胞を沈殿させます。次に、50ミリリットルのチューブに10ミリリットルのCS2培地で細胞を懸濁します。次に、細菌を摂氏37度で増殖させ、毎分180回転で8時間、指数関数的後期まで8時間振とうします。
遠心分離によって細胞を回収します。上清を廃棄し、細胞を10ミリリットルの新鮮なCS2培地に再懸濁します。10マイクログラムの精製プラスミドまたはゲノムDNAを細胞懸濁液に加えます。
毎分180回転で培養物を振とう。次に、遠心分離によって細胞を収集します。細胞を10ミリリットルのBHI培地に再懸濁します。
細胞懸濁液を90ミリリットルの溶融BHI寒天サプリメントと混合します 32ミリグラム/リットルのクロラムフェニコール、および対照実験では1リットルあたり5マイクログラムのテトラサイクリン。混合物を90ミリメートルのシャーレに注ぎ、急速に冷まして寒天を固めます。つまようじを使用して適切な抗生物質を含むプレートにコロニーを複製し、耐性特性を確認します。