海洋生物発光細菌における発光オペロンの発現

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基質合成に必要なルシフェラーゼと酵素をコードする発光オペロンを運ぶ海洋生物発光細菌株から始めます。

人工海水を添加した栄養豊富な寒天プレートに株をストライクして、天然の塩分濃度を模倣し、成長をサポートします。

インキュベートして個別のコロニーを取得し、次に単一のコロニーを単離して人工海水を含む液体培地に接種します。

撹拌しながらインキュベートし、指数関数的段階での一晩の成長を促進します。

定義された量の一晩培養物を新鮮な培地に移し、インキュベートして細菌密度を高めます。

個体数が拡大すると、細菌は自己誘導物質を放出し、細胞内に蓄積して拡散するシグナル伝達分子を放出し、そこで細胞内受容体に結合して発光オペロンを活性化します。

この活性化により、ルシフェラーゼの発現と基質の生合成が誘導されます。

ルシフェラーゼは基質の酸化を触媒し、青緑色の光を発します。

海洋細菌における発光オペロン活性化と発光の指標として、培養物の生物発光を監視します。

テキストプロトコルに従って培地を調製した後、細菌の生物発光株を人工海水培地寒天プレートにストリークし、摂氏24〜30度で一晩インキュベートします。

100ミリリットルの人工海水培地にプレートからの単一のコロニーを接種することにより、一晩培養を準備します。次に、培養物を摂氏24〜30度、120RPMで一晩インキュベートします。翌日、800ミリリットルの人工海水培地に8ミリリットルの一晩培養を接種します。

細菌細胞を摂氏24〜30度、120RPMでインキュベートし、細胞が輝き始めるまで観察します。

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最終更新:22 8月 2026