0 閲覧数 • 2:14 分 • September 26th, 2025
基質合成に必要なルシフェラーゼと酵素をコードする発光オペロンを運ぶ海洋生物発光細菌株から始めます。
人工海水を添加した栄養豊富な寒天プレートに株をストライクして、天然の塩分濃度を模倣し、成長をサポートします。
インキュベートして個別のコロニーを取得し、次に単一のコロニーを単離して人工海水を含む液体培地に接種します。
撹拌しながらインキュベートし、指数関数的段階での一晩の成長を促進します。
定義された量の一晩培養物を新鮮な培地に移し、インキュベートして細菌密度を高めます。
個体数が拡大すると、細菌は自己誘導物質を放出し、細胞内に蓄積して拡散するシグナル伝達分子を放出し、そこで細胞内受容体に結合して発光オペロンを活性化します。
この活性化により、ルシフェラーゼの発現と基質の生合成が誘導されます。
ルシフェラーゼは基質の酸化を触媒し、青緑色の光を発します。
海洋細菌における発光オペロン活性化と発光の指標として、培養物の生物発光を監視します。
テキストプロトコルに従って培地を調製した後、細菌の生物発光株を人工海水培地寒天プレートにストリークし、摂氏24〜30度で一晩インキュベートします。
100ミリリットルの人工海水培地にプレートからの単一のコロニーを接種することにより、一晩培養を準備します。次に、培養物を摂氏24〜30度、120RPMで一晩インキュベートします。翌日、800ミリリットルの人工海水培地に8ミリリットルの一晩培養を接種します。
細菌細胞を摂氏24〜30度、120RPMでインキュベートし、細胞が輝き始めるまで観察します。
本記事では、クオラムセンシングを介した発光オペロンの活性化を研究するための、海洋生物発光細菌の培養およびin situモニタリングについて解説します。このプロトコルにより、細胞密度と光放出のリアルタイム観察が可能となり、微生物間のコミュニケーションと遺伝子調節に関する知見が得られます。
海洋細菌におけるルミネッセンスオペロン活性化のリアルタイムモニタリングは、クオラムセンシングを介した遺伝子発現の直接的な定量的読み出しを可能にします。この機能により、微生物のコミュニケーションおよび遺伝子制御研究において、初期段階でのターゲットバリデーションとメカニズムのデリスキングが可能になります。本手法は、ディスカバリーパイプラインにおけるパスウェイ解析および機能ゲノミクスへの予測的な信頼性を支援します。
本手法は、初期の仮説検証からアッセイ開発、そして微生物系におけるトランスレーショナルリサーチに至るまでの発見の連続的なプロセスに統合されます。
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最終更新:22 8月 2026