JoVE 実験百科事典
微生物学
0 回視聴 • 2:19 分 • September 26th, 2025
抗生物質を含まないポリマーストリップと抗生物質を充填したポリマーストリップを含む注射器を取ります。
注射器に病原菌の代謝活性培養物を入れます。
シリンジを振とうしながらインキュベートし、培地への細菌の均一な曝露を確保します。
インキュベーション中、ロードされたストリップからの抗生物質が培地に拡散し、細菌の増殖を阻害します。
抗生物質を含まないストリップを備えた注射器では、細菌が増殖します。
各シリンジから細菌懸濁液を微量遠心チューブに収集します。
アリコートをマルチウェルプレートに移します。
ルシフェリン、ルシフェラーゼ酵素、溶解剤を含む試薬混合物を加えます。
振とうしながらインキュベートすると、ATPを含む細胞成分が放出される細菌溶解が可能になります。ATPはルシフェラーゼを介した発光反応を駆動します。
マイクロプレートリーダーを使用して、発光を記録します。
抗生物質を充填したストリップに曝露された細菌培養物は、抗生物質に曝露されていない培養物と比較して発光が低下します。
この発光の低下は、抗生物質を充填したストリップの抗菌効果を裏付けています。
バージンおよび薬剤を充填したUHMWPEストリップを3ミリリットルのシリンジに入れます。次に、MHBを含む細菌懸濁液を付属の針を通して1.5ミリリットルマークまでシリンジに引き込みます。
シリンジセットアップを振とうインキュベーターに6時間の指定された時点まで置き、その後7日目まで毎日置きます。指定された各時点の後、シリンジのセットアップを取り出し、2ミリリットルのチューブに培地を分注します。100マイクロリットルの細菌懸濁液を使用して、原稿に記載されているように、リアルタイムの微生物生存率アッセイを実行します。