Corynebacterium glutamicumにおける遺伝子発現の光遺伝学的制御

リボ核酸抗ターミネーターまたはRAT配列の下流に蛍光レポーター遺伝子を運ぶプラスミドで形質転換した コリネバクテリウムグルタミカム の培養物をマルチウェルプレートで取ります。

転写中、RAT-RNAはRNAポリメラーゼをブロックするステムループ構造を形成し、レポーター遺伝子の発現を停止させます。

プラスミドはまた、RAT-RNA結合タンパク質、LicT、および青色光感受性VVDドメインを含む融合タンパク質であるLicVを構成的に発現します。

暗闇では、LicVは単量体のままであり、レポーター遺伝子の転写をブロックするRAT-RNAステムループに結合しません。

培養物を青色光で照らして、VVDドメインのコンフォメーション変化を誘導し、LicV二量体化を引き起こします。

二量体化されたLicVはRAT-RNAに結合し、ステムループ構造を解き、RNAポリメラーゼがレポーター遺伝子を転写させ、蛍光レポータータンパク質を産生します。

蛍光顕微鏡で培養物を観察します。

青色光照射後の強いレポーター蛍光と暗闇での最小限の蛍光は、光遺伝学的制御の成功を確認します。