0 閲覧数 • 2:15 分 • October 30th, 2025
休眠中の細菌胞子と蛍光微小球を含むスライドを参考にしてください。
胞子は発芽タンパク質の赤と緑の蛍光レポーターを運び、内膜は親油性色素を使用して染色されています。
スライドを、油浸対物レンズを備えた構造化照明顕微鏡またはSIMに取り付けます。
蛍光微小球の位置を特定し、焦点を調整して画像のぼやけを最小限に抑えます。
次に、透過光を使用して細菌胞子を見つけます。
SIMモードに切り替え、胞子を照らして蛍光色素を励起します。
胞子の深さ全体にわたって高解像度の蛍光画像を取得します。
親油性色素染色された内膜では、発芽タンパク質は明確な赤と緑の病巣として現れます。これにより、細菌胞子内の発芽タンパク質の位置を正確にマッピングできます。
サンプルのイメージングには、100Xオイル対物レンズを備えた構造化照明顕微鏡にスライドを置き、100ナノメートルの蛍光微小球に焦点を合わせます。
画像のぼやけを最小限に抑えるために対称点拡散関数が得られるまで100X対物レンズの補正リングを調整し、約10個の丸い蛍光微小球の視野を選択します。透過光で胞子に焦点を合わせる前に、画像解析ソフトウェアのガイドとして、指定された励起波長(この場合は561ナノメートルと488ナノメートル)のグレーティングフォーカス調整を適用します。透過光画像を16倍平均モードでキャプチャし、各画像の露出20ミリ秒。
次に、3D-SIM照明モードで胞子の3D構造照明顕微鏡の生の蛍光画像をキャプチャします。