単一細胞細菌相互作用の可視化

蛍光標識された運動性細菌と標識されていない非運動性細菌の共培養物を播種したガラスカバーガラス皿から始めます。

栄養を注入したアガロースパッドが入った皿を取り、周囲のシリコン型を慎重に取り除きます。

皿を傾け、曲げたへらを使用してパッドの端の下にスライドさせます。次に、ペトリプレートの蓋の上に置きます。

パッドを底面を下にして細菌細胞の入った皿に移し、細菌層と均一に接触できるようにします。

パッドを軽く押して気泡を取り除きます。

湿度を維持するために、事前に濡らしたワイプを皿の端の周りに置きます。

倒立顕微鏡下で、一定期間にわたる細菌の行動を追跡します。

細菌が増殖すると、非運動性細菌は化学誘引物質を放出します。運動性細菌はこれらの信号を感知し、非運動性細菌コロニーに向かって移動します。

時間が経つにつれて、運動性細菌が蓄積して非運動性細菌コロニーに侵入し、細菌の相互作用を確認します。

パッドが乾いたら、予熱した滅菌35mmガラスカバーガラス皿の底に1マイクロリットルの共培養物を均一にピペットで移します。

滅菌ピンセットを使用してアガロース型からシリコンの切り欠きを取り除き、横に傾け、わずかに曲げたスパチュラをアガロースパッドの端の下に滑り込ませて、滅菌ペトリプレートの蓋に落とします。

パッドの下に90度の角度のスパチュラをスライドさせ、接種したカバースリップの上に置き、細菌細胞の入った皿にパッドを下側を下にして、パッドを移します。へらを使ってパッドをカバースリップと同じ高さにし、気泡をそっと押し出します。

湿ったおしりふきから余分な水分を取り除き、パッドに触れないように皿の端に置きます。これで、サンプルをイメージングする準備が整いました。