ネズミチフス菌培養の調製

病原菌である ネズミチフス菌を含む培養プレートを取ります。

無菌細菌ループを使用して、培養の純度を確保するために十分に分離された単一のコロニーを選択し、それを脳心臓注入ブロスに接種します。

振とうしながらインキュベートすると、適切な通気と均一な栄養素の分布が得られ、細菌の増殖が促進されます。

一晩培養物を新鮮なスープに希釈して、栄養素の枯渇を防ぎ、指数関数的な成長を維持します。

振とうしながらインキュベーションを続けます。

分光光度計を使用して光学密度 (OD) を測定し、細菌の増殖を追跡します。

培養物が約1のODに達するのを待ちます。これは指数関数的な成長段階を示しており、その間に細菌が栄養素を積極的に利用して急速な増殖を遂げます。

培養物をチューブに移し、遠心分離して細菌を分離します。

上清を廃棄し、細菌の完全性を維持するために細菌を緩衝液に再懸濁します。

遠心分離して残留培地を除去します。

細菌を新鮮なバッファーに再懸濁して、均一で汚染のない懸濁液を得る。

腸チフス菌の培養を開始するには、細菌ループを使用して、1つの細菌コロニーを5ミリリットルの脳心臓注入ブロスに接種します。次に、懸濁液を摂氏37度のインキュベーターで振とうしながら一晩インキュベートします。翌日、この細菌懸濁液1ミリリットルを円錐形フラスコ内の19ミリリットルのBHIブロスに移します。

摂氏37度のインキュベーターで振とうしながら再度インキュベートします。OD₆₀₀ が1に達したら、フラスコをインキュベーターから取り出し、培養物を50ミリリットルのチューブに移します。次に、チューブを摂氏4度で5,400 gで15分間遠心分離します。

上清を除去した後、細菌ペレットを10ミリリットルの滅菌PBSに再懸濁します。遠心分離を1回繰り返した後、ペレットを4.9ミリリットルのPBSに再懸濁します。