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微生物学
0 回視聴 • 2:48 分 • October 30th, 2025
嚢胞性線維症 (CF) は、肺に濃厚で粘着性のある粘液が蓄積し、病原性微生物の増殖をサポートする痰を形成する遺伝性疾患です。
人工CFを調製するには、重要な生化学的特性を持つ溶液を服用してください。
ムチンミックスには、高分子量糖タンパク質であるムチンが含まれており、CFの粘度を複製し、微生物の接着を促進します。
化学混合物は、微生物の代謝をサポートするためにイオンとグルコースを供給します。
生物学的混合物は、微生物の増殖に栄養素を提供します。
すべてを組み合わせて人工喀痰培地(ASM)を形成します。
緩衝剤を添加して、病原体の生存に有利な弱酸性のpHを維持します。
培地滅菌の場合は、ASMをメンブレンフィルター付きの真空ろ過チャンバーに移します。
ムチンの凝集を防ぎ、フィルターの目詰まりを防ぐために、撹拌下でろ過します。
真空は媒体をフィルターに引き込み、微生物汚染物質や高分子凝集体を除去します。
ASMは、CF関連微生物を培養する準備ができています。
ASMMの入った1リットルのボトルに250ミリリットルのASCMを加えて、人工喀痰培地を準備します。次に、250ミリリットルのASBMをミディアムボトルに加えます。塩基性1モルMOPSバッファーで培地を滴定し、pHペーパー上でpH6.3にします。
人工喀が媒体を摂氏4度でろ過されるまで冷蔵します。次に、ろ過プロセスを開始するには、200 ミリリットルの未濾過人工喀痰培地を、0.22 マイクロメートルの孔径フィルターを備えた真空濾過システムに移します。ろ過システムを真空ポンプに接続した後、真空ポンプの電源を入れます。次に、チャンバーをオービタルシェーカーの上に置き、摂氏4度の冷蔵室で毎分90回転で振とうします。
目詰まりの問題を克服するために、350ミリリットルの媒体をろ過した後、フィルターを交換してください。かなりの量をろ過した後、ろ過のためにさらに150ミリリットルの培地を追加します。すべての媒体がろ過されるまで、追加のチャンバーでろ過を繰り返します。