in vitro植物と微生物の相互作用をエミュレートするための植物根滲出液による細菌の処理

植物の成長を促進する根菌である Bacillus mycoidesのストック培養物を取り、接種物を培養プレートに縞模様で描きます。

プレートをインキュベートして、コロニーへの細菌の増殖を促進します。

単一のコロニーを液体培地に接種し、細菌の増殖を促進するために振とうしながらインキュベートします。

液体培地を使用して培養物を希釈し、アッセイに最適な密度を実現します。

ジャガイモの根の滲出液を培養物に加えて、植物と微生物の相互作用をエミュレートします。

培養物を攪拌しながらインキュベートし、シグナル伝達分子と細菌受容体との相互作用を促進します。

この相互作用は、DNAに結合して遺伝子発現を変化させる調節タンパク質を活性化するシグナル伝達経路を誘導します。

培養物をチューブに移し、細菌細胞をペレットにスピンダウンします。

上清を廃棄し、チューブを液体窒素に浸して細胞を瞬間凍結します。

細胞を保存して、植物の根の滲出液によって誘発される細菌遺伝子発現の変化を分析します。

細菌を増殖させるには、摂氏マイナス80度のグリセロールストックからB .マイコイデス 株をLB寒天プレートにストリークし、プレートを摂氏30度で一晩インキュベートします。次に、LB液体培地にプレートからの単一のコロニーを接種し、摂氏30度で一晩200rpmの振とうインキュベーターで培養物を増殖させます。

細菌を処理してサンプリングするには、一晩希釈します B. mycoides 培養物を 90 ミリリットルの予熱した LB 培地で 300 ミリリットルのフラスコでゼロ点ゼロ 5 の初期 OD₆₀₀ に希釈します。その後、10ミリリットルの根滲出液を培養物に加え、対照として10ミリリットルの滅菌脱イオン水処理を使用します。次に、摂氏30度で1時間インキュベートします。

1時間後、培養物を50ミリリットルの遠心分離管に移します。摂氏4度で2分間、9,000倍Gで遠心分離することにより、培養物から細胞を収集します。その後、上清を廃棄し、すぐにペレットを液体窒素で凍結します。

その後、使用するまでマイナス80°Cで保管してください。