型別不可能なインフルエンザ菌に感染したマウスモデルからの気管支肺胞洗浄液の採取

気管が露出した安楽死マウスから始めます。マウスの肺は、病原性細菌である型別不可能な インフルエンザ菌e に事前に感染していました。

カテーテルを気管に挿入し、洗浄バッファーで満たされた注射器に取り付けます。

血栓形成を防ぐ抗凝固剤と、細胞の完全性を維持するための糖を含む洗浄バッファーを投与します。

赤血球、免疫細胞、残留病原体を含む気管支肺胞洗浄液を穏やかに吸引して回収します。

この手順を繰り返し、回収した洗浄液を単一の懸濁液にプールします。

プールされた懸濁液からアリコートを取り出し、遠心分離して細胞を分離します。上清を捨てます。

細胞を溶解バッファーに再懸濁して、赤血球を選択的に溶解します。

遠心分離して残りの細胞を分離し、破片を含む上清を廃棄します。

残りの細胞をバッファーに再懸濁します。

免疫細胞と残留細菌を含む最終懸濁液は、下流の分析の準備が整います。

肺の腹側部分を露出させて気管にアクセスします。20ゲージのカテーテルで気管を挿管します。

カテーテルを使用して、0.8 ミリリットルの BALF バッファーを点眼し、歯の吸引によって洗浄液を収集します。この手順をさらに3回繰り返し、4つの洗浄コレクションを1つの懸濁液にプールします。

100マイクロリットルのアリコートを取り、2,000RPMで2分間回転させます。

上清を除去し、RBC溶解バッファーに再懸濁します。それを回転させ、ペレットを1X PBSで再懸濁します。