JoVE 実験百科事典
微生物学
0 回視聴 • 3:17 分 • October 30th, 2025
チオ硫酸塩を添加した栄養豊富な寒天プレートから始めます。
シアノバクテリアを縞模様にし、明暗を交互にインキュベートして概日周期を維持します。
光の期間中、栄養素の取り込みとチオ硫酸塩は細菌の増殖とDNAの凝縮をサポートします。
暗黒期には、細胞はエネルギーを保存して分裂します。
交互の明暗サイクルは、細胞を成長と分裂の同じ段階に同期させます。
光量の後、スクロース溶液とピペットを繰り返し加えてシアノバクテリアを放出し、色の変化を引き起こします。細胞をチューブに移します。
DNA特異的蛍光色素を加え、暗所でインキュベートします。色素はシアノバクテリアDNAに結合します。
遠心分離してシアノバクテリアを分離し、上清を除去します。
シアノバクテリアをスクロース溶液に再懸濁し、懸濁液をスライドに移し、覆います。
蛍光顕微鏡下では、細胞内の青色の凝縮DNAは、シアノバクテリア細胞周期の同期した概日調節の進行を確認します。
1.5%寒天と0.3%チオ硫酸ナトリウムを含む9センチメートルの滅菌BG-11プレートでシアノバクテリアを増殖させることから始めます。プレートを摂氏23度で12〜12の光サイクル下でインキュベートし、毎秒1平方メートルあたり50マイクロEの光でインキュベートします。細胞を維持するには、毎週新鮮なBG-11寒天プレートに移します。
1週間以内に、文化は緑色の帯として現れます。火炎滅菌ループを使用して細胞の緑色の塊を移し、新しいプレートに縞模様を描きます。DNAの圧縮を観察するには、光期間の終わりに6日間培養した細胞を採取します。
プレートから細胞を放出するには、1ミリリットルの0.2モルスクロースを加えます。次に、細胞懸濁液を回収し、溶液が緑色に変わるまでスクロースの添加と除去を繰り返します。色の変化は、ほとんどの細胞が解放されたことを示します。
次に、500マイクロリットルの浮遊セル溶液をマイクロフュージチューブに移し、ヘクスト染色剤を加えて最終濃度を1ミリリットルあたり1マイクログラムにします。次に、細胞を暗所で10分間インキュベートさせます。次に、細胞をスピンダウンし、上清を廃棄し、10マイクロリットルの0.2モルスクロースに再懸濁します。
次に、1マイクロリットルの懸濁液をスライドガラスに移し、カバースリップを装着し、UVフィルターを備えた蛍光顕微鏡で細胞を観察します。100倍の油浸対物レンズを使用して、ほとんどの細胞で観察できるDNA圧縮の証拠を探します。