シアノバクテリアプラストグロビュの密度勾配精製

プラストグロビュは、シアノバクテリアの細胞質にある脂質が豊富な液滴です。

それらは、構造タンパク質と酵素タンパク質が埋め込まれた両親媒性脂質単層に囲まれた疎水性コア内に中性脂質を貯蔵します。蓄積された脂質は、ストレス中に動員され、細胞機能をサポートします。

それらを単離するには、シアノバクテリアから得られた粗プラストグロブール画分から始めます。この画分はプラストグロビュルに富んでおり、いくつかの残留汚染タンパク質を含んでいます。

この画分をより濃密なスクロース溶液と混合し、超遠心チューブに移します。

軽いスクロース溶液と重ねて、不連続な密度勾配を作成します。

プラストグロビュアの熱劣化を防ぐために、低温条件下で高速で遠心分離します。

勾配は密度によって成分を分離します:脂質が豊富な低密度のプラストグロビュは上部に浮かび、密度が高くタンパク質が豊富な汚染物質は沈みます。

精製されたプラストグロビュアを収集し、凍結培地で瞬間凍結して構造を保存します。

超低温で長期使用してください。

シアノバクテリアから純粋なプラストグロビュルを採取するには、前述のように、500マイクロリットルの粗プラストグロビュル、750マイクロリットルの培地R 0.7、および750マイクロリットルの培地R 0.2を使用して、スクロース勾配を作成します。遠心分離後、純粋なプラストグロビュルを1.5ミリリットルのチューブに集め、純粋なプラストグロビュルを分注します。完了したら、純粋なプラストグロビュアのアリコートを液体窒素で急速凍結し、摂氏マイナス80度で直接保存するか、乾燥粉末に凍結乾燥します。