JoVE 実験百科事典
微生物学
0 回視聴 • 3:22 分 • October 30th, 2025
培地に懸濁された無菌の成虫C .エレガンス ワームから始めます。
試験菌を導入し、インキュベートします。
ワームが餌を食べると、細菌は腸管腔に入り、上皮に付着します。
遠心分離機でワームをペレット化し、摂取されていない細菌を除去します。
緩衝液に再懸濁し、遠心分離し、摂取していない残りの細菌を除去します。
加熱死滅した 大腸菌 を含む培地を加え、インキュベートします。
摂食中、熱で死滅した 大腸菌 は、付着していない試験細菌を腸管腔から置換して排出します。
遠心分離して、排出された細菌を含む上清を除去します。
緩衝液で洗浄し、遠心分離し、上清を除去します。
ワームを氷の上で冷やして麻痺を誘発し、それ以上の摂取を防ぎます。
漂白剤溶液を加えてインキュベートし、残留した外部細菌を殺します。
漂白剤を取り除き、コールドバッファーを加えます。
遠心分離して上清を除去し、残留漂白剤を除去します。
ワームは現在、腸上皮に付着した生存可能な試験細菌のみを保持しており、コロニー形成の定量化が可能になりました。
まず、ワームサンプルを微量遠心チューブ内の 1 ミリリットルの M9TX-01 に再懸濁します。遠心分離によって成虫を収集し、上清を廃棄します。同じ遠心分離パラメータを使用して、ワームを1ミリリットルのM9TX-01で2回、1ミリリットルのM9ワームバッファーで1回すすぎ、外部細菌を最小限に抑えます。次に、各サンプルを培養チューブ内の1ミリリットルのS培地と2倍熱で加熱殺したOP50に再懸濁します。チューブを摂氏25度で20〜30分間インキュベートして、付着していない細菌を腸から通過させます。
インキュベーション後、パージしたワームを1ミリリットルの冷たいM9TX-01で2回すすぎ、上清を廃棄します。チューブを氷の上に10分間置き、ワームを麻痺させます。次に、無香料の漂白剤を含む氷冷のM9ワームバッファー1ミリリットルを各チューブに加えます。
チューブを氷上で最低10分間インキュベートして、外部の細菌を殺します。漂白剤バッファーを廃棄し、チューブを氷に戻して、ワームがポンピングするのを防ぎます。次に、1ミリリットルの冷たいM9TX-01を各チューブに加え、ミニ遠心分離機で5秒間遠心分離します。チューブを氷に戻し、上清を取り除きます。この手順を一度繰り返します。