急速に成長する細菌ビブリオナトリゲンの培養

増殖の早い細菌である ビブリオ・ナトリゲンスの培養物を含むチューブを取ります。

培養物を遠心分離して細菌をペレット化します。残留培地を含む上清を廃棄します。

細菌ペレットを新鮮な培地に再懸濁し、細菌培養調製のために同じ培地を含む円錐形のフラスコに移します。

曝気条件下で振とうしながら培養物をインキュベートします。

ビ ブリオ天然 菌は生成時間が短いため、栄養素を利用し、急速に分裂して集中した細菌集団を生成します。

分光光度計を使用して、光学密度 (OD) を定期的に監視し、細菌濃度を測定します。

ODが約1に達するまで培養物を成長させ、高い代謝活性を伴う指数関数的な成長段階を示します。

培養物を遠心分離管に移します。

低温で遠心分離して、細胞の完全性を維持しながら細菌を分離します。

チューブを氷の上に置き、細胞破片を含む上清を取り除きます。

細菌ペレットを超低温で保存し、下流の分析を行います。

まず、1ミリリットルの一晩の ビブリオナトリゲン 培養物を卓上遠心分離機で10,600倍gで1分間遠心分離して洗浄します。

ペレットを乱すことなく上清を吸引し、1ミリリットルの新鮮なLB-V2培地に再懸濁します。1ミリリットルの洗浄した一晩培養物を、滅菌カバー付きのオートクレーブ滅菌4リットルのバッフル三角フラスコで1リットルの新鮮なLB-V2増殖培地に接種し、1〜1,000の希釈率を達成します。30RPMで振とうしながら摂氏225度で培養物を育てます。

分光光度計を使用して培養物のOD 600を監視し、1.0プラスマイナス0.2に達したら、2本の500ミリリットルチューブで3,500倍gで摂氏4度で20分間遠心分離して培養物を収穫し、氷の上に置きます。上清を吸引し、すぐにペレットを処理します。