マイクロ流体マイクロ液滴培養システムを使用した細菌増殖のリアルタイムモニタリング

流体の流れと老廃物の除去のためのポンプ制御コネクタを備えたマイクロ流体チップを含むマイクロ液滴培養チャンバーから始めます。

オイルを塗った細菌懸濁液の入った試薬ボトルをチャンバー内に置きます。

ボトルのトップチューブをポンプポートに接続し、サイドチューブをチップコネクタに接続します。チャンバーを閉じます。

成長曲線のパラメータを設定します。次に、液滴の生成を開始します。

油と細菌の懸濁液がT接合で収束すると、オイルシャーは水性細菌相を均一な細菌をカプセル化する微小液滴に分解します。

液滴が発生したら、ボトルを取り外し、チップコネクタをポンプポートに接続し、チャンバーを閉じます。

各液滴が検出経路を通過すると、光ファイバープローブが細菌濃度を表す光学密度を測定します。

微小液滴を前後に動かして、細菌の増殖を可能にします。

時間が経つにつれて、光ファイバーは液滴の光学密度を測定し、成長曲線を生成します。

10ミリリットルの滅菌シリンジを使用して、シリンジ針からサイドチューブに3〜5ミリリットルのMMCオイルを試薬ボトルに注入します。次に、試薬ボトルをゆっくりと傾けて回転させ、オイルが内壁に完全に浸透するようにします。

5ミリリットルの初期細菌溶液をボトルに注入した後、5〜7ミリリットルのMMCオイルを注入して試薬ボトルを満たします。試薬ボトルの独立したクイックコネクタAを引き出し、クイックコネクタAをボトルのクイックコネクタBに挿入して、サンプル注入操作を完了します。完了したら、手術室のドアを開けて、試薬ボトルを金属浴に入れます。

チップのC2コネクタと試薬ボトルのクイックコネクタAを引き出します。試薬ボトルのサイドチューブコネクタをC2コネクタに接続し、トップチューブコネクタをO2コネクタに接続します。次に、手術室のドアを閉めます。

成長曲線測定の機能を選択するには、 成長曲線をクリックします。パラメータ設定インターフェイスで、 数値 を15として入力します。次に、 OD検出 スイッチをオンにし、 波長 を600ナノメートルに設定します。[スタート]タブをクリックして、液滴の生成を開始します。

このプロセスが完了するまでに 15 分かかります。

メインインターフェイスにメッセージを促すポップアップウィンドウが表示されたら、操作室のドアを開けて試薬ボトルを取り出し、C2コネクタとO2コネクタを接続します。ドアを閉めたら、ポップアップウィンドウの「 OK 」ボタンをクリックすると、液滴が自動的に培養され、OD値が検出されます。

成長曲線が定常相に達したら、[ データエクスポート] ボタンをクリックしてODデータをエクスポートします。データ保存パスを選択し、栽培期間中に記録されたOD値をドットCVS形式でエクスポートします。成長曲線をプロットするには、ExcelやOrigin 9.0などのマッピングソフトウェアを使用します。