無酸素条件下での嫌気性汚泥培養の調製

蒸留水の入ったフラスコから始めます。

水を沸騰させて溶存酸素を除去し、嫌気性成長を阻害する残留酸素を最小限に抑えます。

酸素の再吸収を防ぐために、窒素で継続的に洗浄しながら水を冷却します。

フラスコを計量天秤に置き、一定量の嫌気性消化槽スラッジを加えます。

汚泥には、さまざまな種類の嫌気性微生物と残留有機物が含まれています。

窒素を加え、すぐにフラスコをゴム製セプタムで密封して、嫌気性状態を維持します。

振とうしながらインキュベートすることで嫌気性菌を均一に分散させ、汚泥中の有機物との接触を改善することで代謝を促します。

無酸素環境では、酸化ストレスによる代謝損傷を防ぐことにより、偏性嫌気性菌が増殖します。

インキュベーション後、より大きなスラッジ粒子を沈殿させます。

次に、注射器を使用して、嫌気性接種物を引き出します。

嫌気性細菌の生存を促進するために、無酸素増殖培地を含む血清フラスコに接種物を移します。

嫌気性消化槽から接種物を調製するには、フラスコに400ミリリットルの蒸留水を加え、沸騰させます。

ヘッドスペースを窒素で永久に洗い流しながら、摂氏約30度まで冷却します。嫌気性消化槽から得られる汚泥を約100グラム加え、希釈を決定するために汚泥の正確な質量を必ず記録する。フラスコのヘッドスペースを窒素と交換し、ブチルゴムセプタムで閉じます。

フラスコを120RPMで30分間振ってください。より大きな汚泥粒子を沈殿させます。次に、注射器とカニューレを使用して5ミリリットルの接種物を取り出し、事前に準備した血清フラスコに注入します。