細菌細胞を用いたマイクロ流体プレートの準備

マイクロ流体の入出力井戸が、蛇行チャネルと実験チャネルで接続されたマイクロ流体プレートを考えます。

チャンネルをプライマーするには、出力にメディアをしっかり加えてください。

プレートをプレートステージに入れ、滅菌カバーで密封します。

出力井戸から入力井戸へのメディアフローを活性化し、チャネル内に閉じ込められた空気のポケットを洗い流します。

プレートを外してください。排出井戸から残留培地を捨て、細菌培養を加えます。

入力井戸には新しいメディアを加えて空気の逆流を防ぎましょう。皿をステージに戻してください。

顕微鏡で観察しながら、細胞を実験チャネルに引き込むために流れを再開します。

セルが蛇行するチャネルへの侵入を防ぐために流量を調整し、詰まりを防ぎましょう。

流れを止めて培養し、細菌の付着を促進します。

プレートを取り外し、残留した細菌培養液と培地を廃棄します。

マイクロ流体プレート内の細菌は、さらなる実験の準備が整いました。

プライミングでは、まず48ウェルのマイクロ流体プレートをパッケージから取り外し、底面のガラス面に触れずに、底面のガラススライドをレンズティッシュで清掃します。マイクロフルイディックチャネルのプライミングには、37度摂氏の最小培地200マイクロリットルを出力井戸にピペットで注ぎ、気泡が出ないように注意してください。次にプレートをプレートステージに置きます。

エタノールが乾燥したら、界面をエタノールで拭き、プレートステージに密着させます。制御モジュールの手動モードで、フルードをルリア・ベルターニブロスとして37度C、最大シアーを1平方センチメートルあたり5ダイネに設定します。出力井をクリックして、出力から入力井戸への流れを起動し、チャネルをプライムします。

5分後にフローを一時停止して種まきの準備をし、皿を慎重にステージから取り除きます。その後、マイクロ流体チャネルへ通じる内円から媒体を除去せずに、出力井戸から残留媒体を吸引します。実験チャネルにシーディングを行うには、入力井戸に最小培地300マイクロリットルを加え、その後排出井戸に300マイクロリットルの細菌培養液を加えます。

プレートをイメージング段階に戻し、置く前にインターフェースをエタノールで拭き取るようにし、ライブカメラ映像で単一のチャンネルにピントを合わせます。ライブフィードを視覚的に監視しながら、1〜2ダイネ/平方センチメートルで約2〜4秒間流れを再開し、セルが実験チャネルには入るが蛇行チャネルには入らないようにし、プレートを温度制御ステージに1時間置いて細胞の付着を待つ。付着期間終了時に、プレートをステージから慎重に取り外し、チャネルを乱さずに排出井戸から細菌を吸引します。

その後、新しいピペットの先端を使って入力ウェルから培地を除去します。