液体培地での純粋な細菌培養の生成

まずは冷凍した細菌のストックから始めましょう。

無菌接種ループを使って、冷凍細菌を栄養寒天プレートにストレート状に塗り付けます。逆さまのプレートを培養して、寒天表面への水の凝縮を防ぎます。

細菌は栄養素を利用し、寒天表面で増殖し、明確な目に見えるコロニーを形成します。

単一のコロニーを選び、栄養素を含む液体培地に接種して純粋な培養を開始します。

チューブを激しく揺らす環境で孵化してください。

揺らすことでチューブ内の通気性が保たれ、細胞が浮遊状態に保たれて底に沈着するのを防ぎます。

また、培地全体に均等な栄養分の分布を確保し、細菌の指数関数的な増殖を促進します。

これにより、密度が高く代謝活性の高い細菌懸濁液が生まれます。

液体培地中の細菌培養は、さらなる実験の準備が整いました。

ストックを使用する際は、無菌接種ループで少量の凍結ストックを取り出し、細菌をストリークしてLB寒天プレート上の単一コロニーを得ます。

プレートを蓋を下にして37度で12〜16時間孵化します。事前に用意されたプレートを入手してください。単一コロニーの無菌10ミリリットル培養管に液体LBブロス4ミリリットルを接種し、滅菌ループで単一コロニーの表面に触れて液体ブロスに移します。その後、シェーカーインキュベーターで225rpmで曝気を使い、37度の環境で12〜16時間培養します。