トリフェニルテトラゾリウム塩化物を用いた ビブリオ・コレラ 菌株比較のための運動性アッセイ

まずは、栄養豊富な培地で培養した病原性細菌である ビブリオ・コレラ菌 株の一晩培養から始めます。

培養液を遠心分離して細胞にペレットを送ります。細胞外化合物を含む上清液を取り除き、ペレットを生理食塩水に再懸浮させます。

次に、滅菌ワイヤー接種剤を培養液に浸し、垂直に運動性寒天に刺して細菌を表面下に横方向に広がらせないようにします。

交差汚染を防ぐために、各株ごとに接種器を炎滅菌してください。

培養皿を培養して、細菌が運動性寒天を通過できるようにします。

寒天にはトリフェニルテトラゾリウム塩化物(TTC)が含まれており、これは代謝活性細胞による還元時に赤色に変色する酸化還元指標です。

運動性株は広範囲でTTCを減少させ、大きな赤色帯を形成しますが、非運動性株は刺し線に限定された染色を示します。

赤いゾーンの大きさと広がりは、各株の運動性を示します。

一晩培養して得られた細胞のペレットを洗い流します。接種運動性寒天プレートは、洗浄液培養に接種用のスタブを挿入し、培地に垂直に刺し込む方法で行われます。

刺す際に接種用の刺し針が曲がらないように注意してください。各接種の間は、ブンゼンバーナーでワイヤーの刺し穴を消毒してください。プレートを蓋を上にして37度で14〜24時間孵化させます。

14時間後は、培養物の過剰増殖を防ぐために運動板を注意深く監視してください。