ビブリオ・コレラ菌のバイオタイプを区別するためのVoges-Proskauerアッセイ

病原性細菌である ビブリオ・コレラ菌の別々の培養物を考えてみましょう。これらは古典型、野生型エル・トール、エル・トール変異体の3つの異なる生物型を持ち、それぞれ遺伝的に異なるサブグループを表します。

各培養液を特殊培地で満たしたチューブに接種し、Voges-Proskauer(VP)アッセイを実施します。

細菌増殖を促進するために振って培養します。

野生型エル・トールは培地内でグルコースを発酵させアセトインを生成するのに対し、古典型および変異型は発酵しません。

次に、各チューブにαナフトールと水酸化カリウムを加え、よく混ぜて培養します。

水酸化カリウムが存在する場合、大気中の酸素がアセトインのジアセチルへの酸化を触媒します。

ジアセチルは培地中のグアニジン基を含む化合物と反応し、ピンクがかった赤色の生成物を形成し、その強さはαナフトールによって強化されます。

色の発達は野生型エル・トール型に特徴的な陽性のVP反応を示し、古典型および変異型生物型は色の形成を示しません。

メチルレッド・ヴォーゲス・プロスカウアー(MR-VP)ブロス4ミリリットルを、事前に調製した10マイクロリットルの一晩培養液を無菌培養管内のMR-VPブロス4ミリリットルにピペットで送り込み、シェーカーインキュベーターで225回転/分、37度で12〜16時間曝気しながら培養します。次に、それぞれMR-VPの一晩培養1ミリリットルに、アルファナフトール150マイクロリットルと40%重量10マイクロリットルの水酸化カリウムを加えます。

そして、短くチューブを渦巻かせます。チューブは常温で最大4時間置き、色が変わるまで放置してください。