酸ストレス下の 大腸菌 における酸活性化シャペロンの保護的役割の評価

環境ストレスに敏感な組換え 大腸菌 培養を例に挙げましょう。

試験培養は酸活性化シャペロンをコードするプラスミドを持ち、対照培養はプラスミド骨格のみを搭載します。

抗生物質を補う培地に単一コロニーを接種し、プラスミド保持を確保し、細菌の増殖を促進するために培養します。

抗生物質と誘導剤を含む新鮮培地で培養液を希釈し、シャペロン発現を活性化します。

培養を中期ログ相まで培養し、その後希釈して特定の光学密度を得ます。

酸を加えてpHを下げ、酸ストレスを引き起こします。

試験培養では、酸性条件下でシャペロンが活性化され、細胞タンパク質を安定化させて凝集を防ぎます。対照培養では、シャペロンの欠如が細胞タンパク質の変性と凝集を引き起こします。

塩基を加えてpHを中和し、酸ストレスを止めます。

時間をかけて光学密度を測定して細菌の増殖を監視します。

検査培養の増殖は、酸ストレス時にシャペロンが保護的役割を果たしていることを示しています。

アンピシリンを含むLB50ミリリットルで一晩培養し、細胞を200回転、30度で培養します。一晩で培養液を40倍にして25ミリリットルのLBにアンピシリンを加えます。

細菌を0.5%アラビノース、30度摂氏、200回転分の環境で、光学密度600ナノメートル(OD₆₀₀ で1.0に等しい)に培養し、HDEBタンパク質の発現を誘導します。pHシフト実験では、LBとアンピシリン、アラビノースを組み合わせて細胞をOD₆₀₀ の0.5に希釈します。適切な5モル塩酸を加えて、それぞれのpH値に合わせて調整します。

指定された時間点の後、適切な量の5モル水酸化ナトリウムを加えて培養物を中和します。中和培養液と液体培養の成長を30度摂氏の温度で12時間、OD測定を用いてモニタリングします。