合成口腔細菌群集を消化の模擬段階に曝露する

まずは人間の口内によく見られる合成細菌群集を含むチューブから始めます。

口内環境を模倣するために、ミュシン(糖タンパク質)、酵素αアミラーゼを含む模擬唾液を加え、振って培養します。

細菌は粘液素と相互作用し、それが凝集を促進しますが、αアミラーゼは唾液の酵素的条件を複製します。

サンプルを採取してください。

次に、胃の環境を模倣するために酸性pHでムシンを含む胃液を模擬し、振って培養します。

酸性の条件は酸に敏感な細菌種を死滅させますが、酸に耐性があり粘液被覆で軽度の酸耐性を持つ細菌種は生き残ります。

別のサンプルを採取しろ。

最後に、重炭酸塩と生理塩を含む模擬腸液を加えます。振って孵化させてください。

塩分豊富な環境はイオンストレスを引き起こし、細菌の膜を破壊して生存率を低下させます。

最終サンプルを採取してください。

3つのシミュレーション後のサンプルはすべて、細菌の生存可能性評価の準備が整いました。

経口消化を模擬するために、50ミリリットルの滅菌チューブに3ミリリットルの細菌群集を移し、3ミリリットルの模擬唾液液(SSF)と混ぜます。

ヒトの唾液タイプ9Aからアルファアミラーゼ75単位/ミリリットル、豚胃タイプ2から2グラム/リットルのムシンを追加します。混合液を37度・100回転で2分間孵化します。DNA抽出とフローサイトメトリー定量のために2ミリリットルのサンプルを採取します。

胃消化を模擬するために、3ミリリットルの細菌に4ミリリットルの模擬胃液(SGF)を加えます。必要なら1モルHClを使ってpHを3に調整してください。サンプルを37度・100回転で2分間培養します。

次に2ミリリットルのサンプルを採取します。小腸の消化には、細菌に4ミリリットルの模擬腸液(SIF)を加えます。必要に応じて水酸化ナトリウムを使ってpHを調整してください。

その後、サンプルを37度・100回転で2分間培養し、2ミリリットルのサンプルを採取します。