自動マイクロバイオリアクターを用いた異なる培地製剤における細菌増殖のモニタリング

分泌性蛍光タンパク質を発現し抗生物質耐性を持つプラスミドを持つ遺伝子組み換え細菌の培養を例にとりましょう。

抗生物質を含む培地に接種し、振って培養して細菌の増殖を促進します。

抗生物質はプラスミドを保持する細胞だけが増殖できるようにします。

培養液が望ましい密度に達したら、自動液体処理システムに移します。

ディープウェルプレートには異なる濃度の必須栄養素が含まれており、それらをマイクロタイタープレートに注入して異なる培地配合を作り出します。

プレートの各ウェルに細菌培養液を接種します。

プレートを密封し、均一な温度と通気性を維持するマイクロバイオリアクターに入れます。

異なる製剤により、細菌の増殖や蛍光タンパク質分泌に変化が生じます。

装置内の光学センサーは細胞密度と蛍光を測定し、培地の製剤間で細菌の増殖と蛍光タンパク質産生を比較することを可能にします。

作業台でのストック溶液保存用の深井戸プレートは、70%エタノールで擦り拭き、その後層流フードで乾燥させることで滅菌します。種子培養は、作動細胞バンクから1つのアリコートを含む25ミリグラム/リットルのカナマイシンを含むBHI培地50ミリリットルを接種することから始めます。必要な実験器具をすべてロボット作業台に置き、対応する実験器具にストック溶液を注ぎます。

その後、培地準備のためのロボット作業を開始し、最終段階である接種を種子培養開始に間に合わせます。約2時間後に種子培養を採取し、600ナノメートルまたは外₆₀₀の光学密度を測定して成長を監視します。毎時間の成長を監視し続けてください。

約5時間後、培養はOD₆₀₀ の3〜4時間の間に到達し、主要な培養菌への接種に使用されます。種子培養を液体ハンドラーの作業台に置き、培地準備の手順を継続します。接種後は培養用マイクロタイタープレートを密封してください。

次に、密封された培養MTPをバイオレクター装置に入れます。そして、あらかじめ定められた培養プロトコルを始めます。