グリセロールまたはジメチル硫酸を用いたシアノバクテリア株の長期凍結保存

まず、シアノバクテリア菌株のループを培養培地に接種します。細胞が望む密度まで成長するまで培養します。

細胞を遠心分離で洗浄し、残留代謝物やゴミを含む上澄液を廃棄します。

ペレットを少量の成長培地に再懸浮させて濃縮懸液を作ります。

この懸濁液をグリセロールというクライオプロテクタントと混ぜ、凍結時に膜を安定させ、氷結晶の形成を防ぎます。

さらに、細胞を貫通し氷の核生成を抑制するクライオプロテクタントであるジメチルスルホキシドを加えます。

サンプルは低温で保存し、代謝活動が停止し細胞が長期間生存状態を保つこと。

蘇生するには、抗生物質を使わずに少量の凍結バイオマスを寒天プレートに削り取り、ストリークをしてストレスを軽減し、徐々の回復をサポートします。

この方法は、将来の研究のためにシアノバクテリア株の長期的な凍結保存と復活を可能にします。

株を長期保存するために、細胞をループ状に30〜50ミリリットルのBG11培地に接種して新鮮な菌株を培養します。培養を3〜4日間、OD₇₅₀ (0.4から0.7)に育てます。

BG11で細胞を一度洗浄した後、約2ミリリットルのBG11に再懸浮させます。濃縮細胞を1本のチューブに0.8ミリリットル加えます。次に、80%フィルターの滅菌グリセロールを0.2ミリリットル加えます。

別のチューブに、濃縮細胞0.93ミリリットルとDMSOを0.07ミリリットル加えます。両方の管はマイナス80度の温度で保存してください。株を復活させるには、チューブを取り外し、鈍い先端のつまようじで抗生物質なしで寒天プレートに細胞をこそげ取ります。その後、通常通りに無菌ループでストリークを伸ばします。