バクテリオファージ感染のための土壌細菌培養の準備

まずは土壌細菌の単離菌群を含む培養皿から始めます。

コロニーを摘み取り、栄養培地を含むバフリング培養フラスコに接種します。

シェイピングで培養を育てる。

バッフルフラスコには内部の隆起があり、揺れ時の乱流を増加させ、通気性を高めます。

このプロセスにより酸素分布が均一になり、細胞の凝集や沈殿を防ぎ、均一な栄養分の拡散を可能にします。

細菌は急速に増殖し、均一な生理的特徴を示す細胞と密な懸濁液を形成します。

定期的にキュベットでサンプルを採取しましょう。

分光光度計を使い、試料に光を通します。透過光の量は細菌の増殖を定量化するために測定され、光学密度(OD)として知られています。

細胞は代謝活性が高く、効率的なバクテリオファージ感染に最も感受性が高いため、指数関数的から初期の定常期に選択される細菌培養を選びます。

アルトロバクター細胞は、LB寒天プレート上にストリークされたコロニーから培養され、30度Cで2〜3日間培養されます。

滅菌ループを使ってコロニーを選び、バッフルされた培養フラスコに50ミリリットルのLBブロスに加えます。フラスコを振動インキュベーターで225回転、30度摂氏で約24時間培養し、ファージ感染実験用の指数関数的または早期定常期細胞を得ます。

細菌の増殖状態を注意深く監視し、細胞が中期から後期の定常成長状態に入るのを防ぎます。ファージ分離の理想的なOD₆₀₀ は0.5から0.7の間です。