カテーテル関連尿路感染症をモデル化するための3Dプリントされたシリコーンコーティングデバイス

滅菌ヒト尿を含むマルチウェルプレートを取ります。

テストウェルに細菌を接種します。コントロールウェルには尿のみが含まれています。

カテーテル関連尿路感染症中にバイオフィルムが形成されるカテーテルの内面を模倣した 3D プリントされたシリコンコーティングされたデバイスを考えてみましょう。

それをウェルに入れ、プレートを密封し、インキュベートします。

細菌はデバイスの表面に付着し、尿からの栄養素を利用し、バイオフィルムを形成します。

デバイスを緩衝液ですすぎ、緩く結合した細菌を除去します。

クリスタルバイオレットを含むマルチウェルプレートにデバイスを置き、バイオフィルムと相互作用して染色します。

水ですすぎ、乾かします。

酸性溶液を含むマルチウェルプレートにデバイスを浸漬して、色素とバイオフィルムの相互作用を破壊し、色素を溶液中に放出します。

分光光度計を使用して、各ウェル内の溶液の吸光度を測定します。

対照ウェルと比較してテストウェルの吸光度が高いことは、デバイス上のバイオフィルム形成を確認し、カテーテル関連尿路感染症のモデル化に適していることを示しています。

まず、プールされたヒト尿サンプルを入手します。135マイクロリットルのプールされたヒト尿を、指定されたレイアウトに従って96ウェルプレートの各オンテストウェルに分注します。

各テストウェルに15マイクロリットルの正規化された一晩細菌培養を接種して、ウェルあたり150マイクロリットルの最終容量を達成します。その後の連続希釈検証ステップのために、この培養物を少なくとも100マイクロリットル予約します。

150マイクロリットルの滅菌プールされたヒト尿を指定されたウェルに加えることにより、ネガティブコントロールウェルを調製します。

次に、ペグを対応するウェルに挿入します。ペグの蓋がプレートと同じ高さになるまで押し下げ、マイクロプレートの蓋で固定し、必要に応じてテープで留めます。

次に、ペグモデルを、蒸発を防ぐために湿った青いロールが入った密閉されたプラスチック製の浴槽または袋に入れます。摂氏37度で24時間静的にインキュベートします。

接種物の検証のために、180マイクロリットルのPBSを96ウェルプレートの最初の列の2列から6行目に分注してから、予約した培養物を追加します。

次に、20マイクロリットルを最初のウェルから2番目のウェルに移し、上下にピペッティングして穏やかに混合します。最初の接種物が最終ウェルまで希釈されるまで、連続希釈を続けます。

次に、各希釈液から10マイクロリットルのスポットを適切な固体培地に3回ずつプレートします。摂氏37度で一晩インキュベートした後、各スポットからコロニーを数えます。

バイオフィルムの定量化のために、ペグモデルをマイクロプレートから取り外し、ペグを上に向けて、炎下または微生物学的安全キャビネット内で反転させ