Name: フローサイトメトリーによる肺および肺リンパ節の分析とマウスの非外科的気管内注入 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-02T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: 学ぶマウスの非外科的気管内注入法とフローサイトメトリーによる肺免疫細胞解析。試薬を肺に直接投与し、リンパ節への細胞動態を分析する技術を習得できます。

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1。プロセスの前に、以下の項目を準備して収集する<ol><li>手順の実行中にマウスを抑制するために木製のプラットフォームを構築するための）は図1aの画像）と1bを参照してください。 </li><li>リンパ節のための消化ミックス - HBSS + 1.25mg/mlコラゲナーゼTypeIVまたは2.5 mg / mlのコラゲナーゼD </li><li>肺のための消化ミックス - HBSS + 1 mg / mlのコラゲナーゼ</li><li> LDLNsを可視化するために腹腔内注射のためにPBS中にラテックスビーズを（1:20）で希釈</li></ol> 注：LDLNsを見つけるのは小さいと難しいです。それらを見つける方法を学ぶために、マウスに赤色蛍光ラテックスビーズは、IP希釈1:20の200μlの注入。腹膜は、これらのLDLNs 8に排出されます。 24 HPIは、前述のようにマウスの胸腔を公開。 LDLNsは腹膜腔から排出ビーズからピンク色表示になります。 <ol start="5"><li>赤血球（RBC）のLysis Buffer - 0.15M NH 4 Clを 、10mMのKHCO 3、0.1mMの硫酸ナトリウム 1LのdH 2 0 EDTA。 7.2から7.4にpHを調整し、室温で保管。 </li><li> 70μmまたは100μmのセルストレーナー</li><li> 0.5M EDTAのストック溶液は、pH = 8.0 </li><li> CaCl 2とMgCl 2をなしHBSS </li><li>はさみと平滑末端鉗子</li><li>喉頭鏡</li><li>角度で強制経口投与の針（22ゲージ）曲げ（図2） </li><li>発泡スチロールボードとマウスを拡散するためのピン</li><li>トップパンのバランス</li><li>アニリンブルー溶液- H 2 Oで10mg/ml </li></ol> 注：我々はそれ注入技術の実証のためのこのソリューションを使用する。 2。マウス麻酔の準備と管理<ol><li>最終濃度がそれぞれ2mg/mlと10mg/mlとなるように滅菌PBSでキシラジンとケタミンの混合物を準備します。 </li><li>トップパンのバランスの上でマウスを量る。 </li><li>それぞれのマウスに必要な用量を計算する。キシラジン（2-4 mg / kg体重）とケタミン（70〜80 mg / kg）を体重で投与量は準備された混合物の適切な量を使用しており、intaperitoneallyを注入する。各マウス系統は、麻酔薬の最適化が必要な場合があります。あまりにも多くの麻酔薬を投与したマウスは、接種を肺に注入された後に致命的になる可能性が減少した呼吸速度を持つことができます。 </li><li> 3-5分後、麻酔の効果のためのマウスを観察。マウスが完全に麻酔であることを確認するために、次の標識を確認してください： <ol><li>呼吸速度が遅くなるはず。 </li><li>首が拾ったときにマウスがその腕を伸ばしてはいけません。 </li><li>後肢が刺激されているすべての応答があってはいけません。 これらの基準が満たされていない場合、数分間待つと次のステップに進む前にもう一度確認してください。 </li></ol></li></ol> 3。気管内注入<ol><li> 50μlの生理食塩水でinnoculumを準備します。 innoculumと無菌ベントの強制経口投与の針を備えた1ミリリットル注射器を埋める。注射器は、流体のすべてが肺に注入されるようにinnoculum背後に100μlのエアポケットをロードする必要があります。 </li><li>ワイヤ上の切歯がぶら下がって斜め木製の台の上にマウスを置き、そっとリボンの部分のある場所でそれを抑制する。 </li><li>左手で喉頭鏡をオンにする（あなたは右利きの場合）と平滑末端ピンセットをつかむ。そっと口を開く詮索する喉頭鏡と鉗子の先端を使用してください。 </li><li>鉗子で、舌を引き出し、側にそれを保持する。口の奥に向かって喉頭鏡のブレードをガイド。あなたが気管の開口部が表示されるまで、90 °の角度で非常に穏やかに押された喉頭鏡を保持。場所で喉頭鏡を保持する。口から舌を引っ張るとは組織の損傷が発生しないので、これは穏やかに行われる必要がある場合は注意が必要です。 </li><li>針の曲がりが正面切歯がなるまで、もう片方の手で、あなたの右の手で曲げ胃管栄養針を備えたinnoculumを含む1ミリリットル注射器を、取ると気管に針を挿入する。 innoculumを提供するために均等にプランジャーを押してください。 innoculumはバブルではないはずです。できるだけ早く気管の針を引き抜きます。マウスは呼吸ができなくなると気管が長時間ブロックされていれば死んでしまう。 innoculumが肺に吸入できるようにするために数秒間直立マウスを押したまま。 </li><li>プラットフォームのノックアウトマウスを取り出し、加熱ランプの近くに置きます。長時間直接加熱マウスを放置しないでください。マウスは、プロシージャ（回復時間は菌株によって異なる場合があります）後30分以内に完全に目覚めでなければなりません。マウスはこの期間中に熱心に観察されるべきであると、熱過ぎたり冷た過ぎたりすることは許されないこれはまた、死に至る呼吸困難にマウスを置くことができます。 </li></ol> 4。フローサイトメトリーのための収穫と処理肺所属リンパ節と肺<ol><li> AVMAの安楽死ガイドラインに従って目的のメソッドを使用してマウスを生け贄に捧げる。これは、個々の収穫の成果によって異なる場合があります。ペントバルビタールナトリウムの致死行うの管理は、適切な安楽死の手順の例です。我々はCO 2で安楽死の否定的な肺の効果を見ていない。 </li><li>解剖ボード上の腕と脚を固定する。はさみと腹側の中央に沿って切開を加えます。お肌を引っ張ると胸壁の筋肉を公開。 </li><li>腹部の臓器を公開する胸壁の筋肉を通して切開を加えます。 </li><li>鉗子や穿刺ダイアフラムと胸骨の先端を保持する。胸郭の側面に沿って振動板をカット。 </li><li>解剖の基板面に平行なはさみは、両側の背腹のラインに沿って胸腔カットスルーで。 </li><li>わずかに胸郭を持ち上げる。心臓の右側に、ちょうど胸腺の下に、二つのリンパ節を探します。少し大きめの第三リンパ節は気管に垂直に動作する小動脈の血管の下に位置しています。収穫のリンパ節リンパ節消化ミックス1mlに。 </li><li>リンパ節を採取した後、ピンセットで心臓を保持し、別の肺をつかむ。 6ウェルプレートに、氷冷PBSの3ミリリットルに収穫の肺。 </li><li> 、肺の葉を分離するPBSを吸引し、鉗子や鋏を使用して小片に葉を切る。肺のための消化ミックスの3ミリリットルを追加。このステップの間に氷の上で6 - ウェルプレートを保管してください。 </li><li> 37℃で30分25-30分と肺のリンパ節をインキュベート℃に氷上に反応し、場所を停止する消化混合物の各々に10mMの最終濃度にEDTAを追加。 </li><li> 3ミリリットル注射器を使用して、18GA針を通して3回肺の部分を渡します。マッシュ1ミリリットル注射器のプランジャーのバックエンドを使用して70 -100μmのセルストレーナーを通って肺とLNSの作品。のCa 2なしHBSS 10mlの+およびMg 2 +を持つセルストレーナーを洗浄してください。 5分間、500 × gで遠心する。 </li><li> RBC溶解バッファー5mlにペレットを再懸濁し、室温で3分間インキュベート。のCa 2なしHBSS 10mlのを追加する+およびMg 2 +溶解して急冷する。 5分間、500 × gで遠心する。それぞれ10ミリリットルと5ミリリットルに肺とLDLN単一の細胞懸濁液を立ち上げます。トリパンブルー排除により、血球計を用いて生細胞を数える。セルはフローサイトメトリーのために染色する準備が整いました。肺の1葉は、フローサイトメトリーのための十分な場合があります。他の葉は、そのような組織のためのサイトカインまたは組織のホモジネートと同じマウス内の他の実験の質問のために使用することができます。 </li></ol> 5。代表的な結果： 後発開発途上国（LDCs）や肺の肺胞マクロファージは、肺の肺胞腔から抗原を取得、すぐに注射した後。図3は、CD11cは+（後発開発途上国（LDCs）や肺胞マクロファージに発現する）の割合蛍光標識炭疽菌の芽胞陽性の細胞は、30分後に注入を示しています。この時点では、肺の単一細胞の懸濁液中のCD45 + CD11c +細胞の〜15.9％ 炭疽菌の胞子（図3、下側のパネル）をかくまった。肺のCD11c +細胞のさらなる特徴付けのために、金とBraciale 4を参照してください。蛍光標識ビーズを日常的にLDLNs 9に粒子状抗原の人身売買を評価するために使用されます。 LDLNsに肺からこの輸送を評価するために、蛍光ラテックスビーズは、LPSとLDLNsでそれを注入した24 HPIで分析した。 LDLNsのCD11c ハイテク細胞の約4％が24hpi（図4）で蛍光ビーズをかくまった。これらの代表的な実験は、このプロトコルは効率的にLDLNsへのトラフィック、それらを後に肺に吸入粒子状抗原を獲得し、細胞を追跡するために使用できることを示している。 <img src="/files/ftp_upload/2702/2702fig1.jpg" alt="図1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図1"> 図1。木製のそれ注入中にマウスを抑制するためのプラットフォーム。木製のブロックが斜めにカットし、金属の棒は、正面図1a適合させたれた）と側面図を図1b）。ワイヤーの小片は、マウスの前部歯を固定する金属の棒に巻き付けていた。リボンの部分は、手順の間の場所を保存しておいてマウスの周りに結びつけるためのプラットフォームに装着された。 <img src="/files/ftp_upload/2702/2702fig2.jpg" alt="図2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図2"> 図2。その注射のための強制飼養針。強制飼養針は（右）に注射用〜135 °（左）の角度で曲がっていた。 <img src="/files/ftp_upload/2702/2702fig3.jpg" alt="図3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図3"> 図3。 炭疽菌の発現に注入されたGFP（スターン- p6GFP）、5時間後の課題を抱いて肺内のすべてのCD11c +細胞の割合 。 AJマウスは1xでの挑戦であった10 8 GFP -炭疽菌の胞子と肺は5時間後の感染で分析した。ドットプロットでは、 炭疽菌の陽性なのCD11c +肺細胞の割合を示しています。 <img src="/files/ftp_upload/2702/2702fig4.jpg" alt="図4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="図4"> 図4。私は以下のリンパ節の24時間排水肺の蛍光ビーズの検出（緑/黄）。トン注入。 AJマウスは、それとLDLNsが24hpi分析した10μgのLPS（右パネル）を含むPBS（左パネル）または5 × 10 9 Fluoresbrite YGミクロスフェア（0.5μmの）のどちらかを与えられた。代表的なドットプロットでは、空のチャネルに対してプロットした蛍光ビーズを抱いLDLNsのCD11c ハイテクの細胞の割合を示しています。

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</ol>

利害の衝突は宣言されません。

我々は、肺からLDLNsに炭疽菌の胞子の人身売買を研究するためにこのプロトコルを利用してきた。同様のアプリケーションの場合は、肺に送達粒子の数を慎重に注入材をフローサイトメトリーによってLDLNsで検出することができるように選択する必要があります。我々はまた、正常細胞と蛍光標識抗体を使用して、特定の肺の細胞集団のラベリングの養子移入のためにこのメソッドを使用している。さらに、この方法は日常的に直接肺に10にブレオマイシン（肺線維症の化学誘導物質）やサイトカインを管理するために使用されます。 このメソッドは肺に試験物質の一貫性のある配信を可能にするが、それは広範囲な訓練と検証を（肺の中に染料を浸透させることによって達成）が必要です。それが重要な相互作用と免疫応答が開始されることがあります上気道を除外するため、このメソッドは、吸入の他のルートと同じ生理的関連性を持っていない可能性があります。しかし、それは解釈が頭頸部の局所リンパ節で、気道上皮の刺激による投与剤の摂取により、複雑にすることができる場所が望ましい。実験を設計する際はすべてのモデルと同...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント（省略可能） </th></tr><tr><td> 70μmセルstariner </td><td> BD </td><td></td><td></td></tr><tr><td>アニリンブルー</td><td>フィッシャー</td><td> A967 - 25 </td><td></td></tr><tr><td>動物の餌針</td><td>ポッパーとサンズ株式会社</td><td> 7920 </td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼ</td><td>シグマ</td><td> C2139 </td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼTypeIV </td><td>ワージントン</td><td></td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼD </td><td>ロッシュ</td><td> 11088974103 </td><td></td></tr><tr><td> DPBS </td><td>インビトロジェン</td><td> 14190 </td><td></td></tr><tr><td> Fluoresbrite YGミクロスフェア（0.5μmの） </td><td> Polysciences、株式会社</td><td> 17152 </td><td></td></tr><tr><td>塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムなしHBSS </td><td>インビトロジェン</td><td> 14170 </td><td></td></tr><tr><td>ケタミン塩酸（100mg/ml） </td><td>ホスピーラ株式会社</td><td></td><td></td></tr><tr><td>喉頭鏡ブレード</td><td> PennCentury株式会社</td><td>モデルLS - 1の</td><td>を参照してください<a href="http://www.penncentury.com">www.penncentury.com</a> </td></tr><tr><td>軽量の光ファイバー喉頭鏡</td><td> WelchAllyn </td><td> 80814 </td><td></td></tr><tr><td>レッド蛍光ビーズ（0.5μmの） </td><td>インビトロジェン</td><td> F8812 </td><td> ip注射用</td></tr><tr><td>キシラジン（100mg/ml） </td><td>ロイド研究所</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

フローサイトメトリーによる肺および肺リンパ節の分析とマウスの非外科的気管内注入

Non-surgical Intratracheal Instillation of Mice with Analysis of Lungs and Lung Draining Lymph Nodes by Flow Cytometry

このような肺胞マクロファージや肺樹状細胞（後発開発途上国）などの貪食細胞が継続的に肺の肺胞腔からの抗原をサンプリング。後発開発途上国（LDCs）は、特に、肺所属リンパ節（LDLNs）彼らは免疫原1,2の様々な適切な免疫応答を開始するT細胞に吸入抗原を提示場所。に移行することが知られていますマウスの肺と空気中の抗原との間のモデルの相互作用に、抗原は気管内に5またはエアロゾル6など、鼻腔内に1,3,4に投与することができる。それぞれの経路による配送は別個の技術的スキルと実験を設計する前に考慮する必要があるの制限を伴います。例えば、鼻腔とエアロゾルの暴露は、肺や上気道の両方に抗原を提供します。したがって、抗原は、潜在的に結果の解釈を複雑にして、鼻関連リンパ組織（NALT）7にアクセスできます。さらに、嚥下、くしゃみやマウスの呼吸数も納入線量の不整合が生じる可能性があります。上気道の関与がいくつかの研究のために好まれるかもしれませんが、それは特に肺に開始されたイベントを中心に実験を複雑にすることができます。それは直接肺に試験材料を提供し、NALTをバイパスするため、この設定では、気管内（IT）ルートが望ましい。多くのIT注入プロトコルでは、口腔や肺にアクセスするために気管の外科的暴露による気管のどちらかのブラインド挿管を伴う。ここで、我々はそれを点眼するためのシンプルで一貫性のある、非外科的方法を説明します。気管の開口部は、喉頭鏡を用いて可視化されており、曲げ胃管針は、innoculumを提供するために気管に直接挿入されます。我々はまた、フローサイトメトリーにより抗原の人身売買の分析のためにLDLNsと肺の収穫と処理を行うための手順について説明します。

我々は気管を経由して麻酔したマウスの肺に試験物質の非外科的配信を示しています。このメソッドは、肺の細菌やウイルス性病原体への曝露、サイトカイン、抗体、ビーズ、化学物質、または染料を許可します。我々は、さらにフローサイトメトリーのために肺および肺リンパ節（LDLNs）の収穫と処理を説明します。

肺胞マクロファージや肺樹状細胞（LDC）などの食細胞は、肺の肺胞腔から抗原を継続的にサンプリングしている。LDCは、...

この手順の目的は、ガバージュ針を用いてマウスの肺に試験物質を非外科的に注入し、その後、肺および肺ドレナージリンパ節を解析することです。まず、麻酔下にあるマウスの気管に照明付き喉頭鏡と曲げたガバージュ針を挿入します。次に、喉頭鏡とガバージュ針を介して、動物の肺に試験物質を注入します。次に、肺と所属リンパ節を摘出します。最後に、肺とリンパ節を単一細胞懸濁液に調製します。最終的に、本手法により、試験物質と肺免疫細胞との関連、および肺所属リンパ節への細胞の移行について、フローサイトメトリーによる解析が可能となります。本手法の、経鼻投与やエアロゾル曝露などの既存手法に対する主な利点は、鼻腔関連リンパ組織を回避して、肺に試験物質を直接的に届けることができる点にあります。さらに、気管内投与のための外科的処置を伴うラットへの投与と比較して、簡便に実施可能です。本手順のデモンストレーションは、Richie研究室のポストドクターであるElizabeth Enti氏と、lens研究室の大学院生であるManji氏が行います。マウスを麻酔した後、生理食塩水 50 µL で接種液を調製します。滅菌済みの曲がり胃管針を装着した 1 mL シリンジに接種液を満たします。すべての液体が肺内に注入されるように、接種液の後方に 100 µL のエアポケットをシリンジに入れておきます。マウスを斜めの木製プラットフォームに乗せ、ワイヤーに門歯を掛けた状態でリボンを用いて緩やかに固定します。次に、片手で喉頭鏡の電源を入れ、もう一方の手で鈍端鑷子（ずんたんせっし）を把持します。喉頭鏡の先端と鑷子を用いて、口をゆっくりと開かせます。舌を引き出し、側方に保持します。喉頭鏡のブレードを口の奥へと導きます。気管の開口部が見えるまで、喉頭鏡を90度の角度で非常に緩やかに押し下げたままにします。片手で喉頭鏡を固定したまま、もう一方の手で接種液を入れた曲がりガバージュ針付きの1 mLシリンジを持ちます。針の曲がり部分が前切歯のあたりに来るまで、針を気管内に挿入します。気泡が入らないように、プランジャーを均等に押し下げて接種液を注入します。速やかに針を気管から抜きます。マウスを数秒間直立させ、接種液が肺に吸入されるようにします。マウスを ısı温ランプの近くに置き、覚醒するまで待ちます。安楽死させた後、マウスの四肢を解剖板にピンで固定します。はさみを用いて、腹側の中央に沿って切開します。皮膚を慎重に剥がし、腹膜を露出させます。腹膜を切開し、腹部臓器を露出させます。ピンセットで胸骨の先端を保持し、ハサミで横隔膜を穿刺します。解剖台の表面と平行にハサミを使い、肋骨の側面に沿って横隔膜を切断します。胸腔の背腹線に沿って両側をわずかに切開します。心臓の右側の肋骨を上に持ち上げます。胸腺の直下にある2つのリンパ節を探します。3つ目のわずかに大きなリンパ節は、気管に垂直に走る小さな動脈の直下に位置しています。リンパ節を1 mLのリンパ節消化液に回収し、混合して氷上に置きます。リンパ節の回収後、肺を6ウェルプレートに回収します。6ウェルプレートを氷上に置いたままPBSを吸引し、ピンセットとハサミを用いて葉を細かく切断します。各リンパ節を26ゲージの針で固定し、別の26ゲージの針を用いてほぐします。すべての細胞を確実に遊離させるため、肺には3 mLの消化液を、リンパ節には1 mLの消化液を加えます。リンパ節を25～30分間、肺を30分間、37 °Cでインキュベートした後、各消化混合液に最終濃度10 millimolarとなるようにEDTAを加え、反応を停止させて氷上に置きます。3 mLシリンジを用い、肺の組織片を18ゲージの針に通します。肺の組織片とリンパ節を、70～100 micronのセルストレーナーで3回すり潰します。1 mLシリンジプランジャーの背面を用いて、カルシウムおよびマグネシウム不含のHBSS 10 mLでセルストレーナーを洗浄します。細胞サンプルを4°C、500 ×gで5分間遠心分離します。ペレットを5 mLの赤血球溶血緩衝液で再懸濁し、3分間インキュベートします。室温で、溶解を停止させるためにカルシウムおよびマグネシウム不含のHBSSを10 mL添加し、サンプルを500 ×gで5分間遠心分離します。肺および肺漏出リンパ節の単一細胞懸濁液の液量を、それぞれ10 mLおよび5 mLに調整します。トリパンブルー排除法と血球計数器を用いて細胞数を計測します。これら2つの図では、AJマウスに1×10⁸個のBacillus anthracis胞子を接種し、感染30分後に肺をフローサイトメトリーで分析しました。これらのドットプロットはゲーティング戦略を示しています。これらのパネルは、Bacillus anthracis胞子陽性であるCD45陽性CD11c陽性肺細胞の割合を示しています。この図では、AJマウスに気管内投与を行い、その後、肺ドレナージリンパ節を解析しています。代表的なドットプロットは、蛍光ビーズを保有する肺ドレナージリンパ節内のCD 11 C high細胞の割合を、空チャネルに対してプロットしたものです。左側のパネルはPBSを投与したマウスの結果を示し、右側のパネルは10 µgのLPSを含む5×10⁹個の蛍光黄色緑色マイクロスフィアを投与したマウスの結果を示しています。この手法は、肺で具体的にどのようなイベントが開始されるのか、また、吸入された抗原が肺から排泄リンパ節へとどのように輸送されるかなど、この分野における重要な疑問を解決するのに役立ちます。

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

ヒトにおける肺疾患の状態を模倣するモデルの使用は、特定の疾患の病態および/または病因を研究するため、および治療的介入を開発するために重要である。ここで直接マウス肺への外因性材料を提供することができ、非侵襲的気管内挿管法が提示されている。...

マウス肺の病理生理学を研究するための非侵襲的気管内挿管

病原体感染に対する宿主の免疫応答が厳密に調節されたプロセスである。マウスにおけるリポ多糖肺露光モデルを利用し、それは疾患の病因に関連付けられている複雑な機構の高解像度の評価を実施することができる。...

マウスにおける宿主の免疫応答を評価する口腔咽頭気管内PAMP管理および気管支肺胞の活用

試薬の挿管媒介気管内（IMIT）点滴は、呼吸器疾患を研究するための優れた、非侵襲的な方法だけでな​​く、肺に直接治療薬を浸透させるための方法である。これは前臨床試験のために適して迅速かつ高度に再現可能な方法である。...

挿管媒介気管内（IMIT）点眼：非侵襲的、肺特異的送達システム

本稿の目的は、大幅に肺癌または他の病状とのセットアップとマウスの肺の分析を支援する単純な方法を記述することです。我々は、簡単かつ確実に肺の点滴注入、固定、および肺容量の測定を行うために3プロトコルを提示します。...

マウス肺癌研究における有用な点滴や固定方法

この記事では、挿管を経由して、マウスの気管に直接ブレオマイシンを投与するための迅速かつ簡単な方法を提示します。この方法の主な利点は、習得が容易で、それは非常に再現可能であることであり、特殊な装置または長い回復時間を必要としません。...

マウスの気管の迅速な挿管のための改善された方法

我々は、精密カット肺スライス（PCLS）を生成し、肺における種々の免疫細胞型の局在を可視化するために、それらを免疫染色するための方法を記載しています。我々のプロトコルは、種々の条件下で多くの異なる細胞型の位置と機能を可視化するために拡張することができます。...

精密カットライブ肺樹状細胞を可視化するために、マウスの肺スライスを

ここで非小細胞肺癌を勉強する時間とコスト削減モデルとしてマウス肺腺癌細胞の低侵襲同系同所性同種移植モデルについて述べる。...

PD L1 の発現を研究する同系の肺腺癌細胞の同所性同種移植

マウスにおける実験剤の気管内(IT)投与は、しばしば遠位肺への非対称的な送達をもたらす。 本報告では、生きているマウスの各肺を非手術的にカニューレする直接気管支内(IB)アプローチについて述べた。...

マウス肺内の選択的剤沈着を改善するための直接気管支内投与

この研究では、マウス呼吸器系の免疫集団を単離するための効果的で再現可能なプロトコルを提示する。また、9色ベースのフローサイトメトリーパネルを使用して、健康なマウスの肺に存在するすべての自然免疫細胞および適応免疫細胞を同定する方法も提供しています。...

マウス肺の自然免疫細胞および適応免疫細胞の同定のためのフローサイトメトリー分析

ここでは、非侵襲的中咽頭気管内挿管 を介した 気管内リポ多糖(LPS)送達のプロトコルを提案します。この方法は、動物の外科的処置の外傷を最小限に抑え、LPSを気管、次に肺に正確に送達します。...

マウスにおける非侵襲的気管内リポ多糖点滴

マウス肺内気管移植(IPTT)モデルは、肺移植後の閉塞性気道疾患(OAD)の研究に有用です。同種移植後の気道閉塞における肺特異的な免疫学的および血管新生挙動に関する洞察を高い再現性で提供します。ここでは、IPTTの手順と期待される結果について説明します。...

マウス肺内気管移植:肺移植後の閉塞性気道疾患を調査するためのモデル

学ぶマウスの非外科的気管内注入法とフローサイトメトリーによる肺免疫細胞解析。試薬を肺に直接投与し、リンパ節への細胞動態を分析する技術を習得できます。

フローサイトメトリーによる肺および肺リンパ節の分析とマウスの非外科的気管内注入

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