脱細胞化ラット腎臓の調製:採取したラット腎臓から無細胞血管全臓器足場を生成する手順

脱細胞化された全臓器足場は、無傷の血管網を持つ三次元の細胞外マトリックスで構成されています。これらの足場は特定の組織組成と機能的完全性を保持し、臓器生物工学において重要な役割を果たします。

脱細胞化されたラット腎臓を準備するには、まず、その主要な動脈および静脈血管系である腹部大動脈および下大静脈とともに、採取したばかりのラット腎臓を入手します。尿管、小動脈、静脈の分岐部を結び、その後の灌流プロセス中の液体の漏れを防ぎます。

臓器の水分補給を確保するために、腎臓を適切な緩衝液に入れます。適切なサイズのカテーテルを主要な血管系に挿入し、固定します。カテーテルを蠕動ポンプに接続します。抗凝固剤を含む緩衝液を適切な流量と圧力で腎臓を所望の時間灌流します。

このステップは、静脈流出を通じて臓器から血液を効率的に除去するのに役立ちます。灌流液を非イオン性界面活性剤に変更して、細胞膜を透過性にします。その後、陰イオン性界面活性剤で臓器を灌流して細胞膜と核膜を効果的に可溶化し、細胞溶解と細胞内内容物の放出をもたらします。

遊離した細胞成分と破片は腎臓から流れ出し、徐々に半透明になります。抗生物質と抗凝固剤を含む適切な緩衝液を脱細胞腎臓に注射し、臓器から残留界面活性剤と残っている破片を除去します。抗生物質は、脱細胞化器官内での細菌の増殖の可能性を防ぎます。

腹部大動脈と下大静脈を含む左腎臓を採取します。尿管、胸部大動脈、上大静脈、および腹部大動脈の枝を結紮します。臓器を10センチメートルのペトリ皿のDPBSで水分補給した状態に保ちます。腹部大動脈と下大静脈を 23 ゲージのカテーテルでカニューレ挿入します。

残留血液を除去するには、カニューレを蠕動ポンプに接続し、500ミリリットルのDPBSと1ミリリットルあたり16単位のヘパリンで臓器を5rpm、摂氏37度で90分間洗浄します。腎臓を脱細胞化するには、1%Triton X-100で3時間灌流し、次に0.75%SDS溶液で40ミリリットルの水銀柱の一定圧力で6時間灌流します。

残留SDSを除去するには、サンプルを蒸留水中で1%ペニシリンで18時間灌流し、次に滅菌DPBSと1ミリリットルヘパリンあたり16単位で90分間灌流します。