タンパク質間相互作用を検出するためのグラフェンバイオセンサベースの電界効果バイオセンシング

タンパク質間相互作用(PPI)は、ほとんどの生物学的プロセスの調節に重要です。

電界効果バイオセンシングを使用してPPIを検出するには、グラフェン電界効果トランジスタチップから始めます。このチップは、ソース電極とドレイン電極の間の半導体チャネルとしてカルボキシル官能化グラフェン表面で構成されています。

チップをカルボジイミドとN-ヒドロキシスルホスクシンイミド、スルホ-NHSの新鮮な溶液とともに、両性イオン緩衝液中でインキュベートします。この緩衝液は適切な pH を生成し、カルボジイミドとスルホ NHS がチップの官能化カルボキシル基を活性化し、アミン反応性エステルを形成できるようにします。

ターゲットタンパク質溶液を追加します。第一級アミンはアミン反応性エステルと反応し、アミド結合形成によってチップ上のタンパク質を固定化します。アミン含有急冷液を加えて、結合していないアミン反応性エステルをブロックし、非特異的結合を防ぎます。

チップを電子リーダーに挿入し、バッファーで校正します。リーダーは電極間に一定の電圧を印加します。分析種が結合していない状態で電極間の電流が測定されます。

最も低い分析種濃度を追加します。分析種タンパク質とチップ上に固定化されたターゲットとの間の相互作用により、グラフェン表面の局所的な電荷分布が変化し、I応答(電極間の電流の流れの変化)として記録されます。

記録後、バッファーで洗浄して結合した分析種を解離します。分析種の濃度を上げながら分析を繰り返します。

分析種濃度の増加に伴う I 応答の緩やかな増加は、ターゲットと分析種の間に強い PPI があることを示しています。

まず

、同量のEDCとスルホNHS溶液を上下にピペッティングして混合します。同社から供給されたバイオセンサーチップを、蓋付きのガラス製ペトリ皿に入れます。チップの活性化に関与するすべての官能基化ステップは、ペトリ皿内で行うことが示唆されています。50マイクロリットルの1モルMESバッファーをバイオセンサーチップに塗布します。室温で1分間インキュベートします。

次に、バッファーを吸引し、50マイクロリットルのEDC / スルホNHS溶液をセンサーチップにすぐに塗布します。ペトリ皿に蓋をし、室温で15分間インキュベートします。チップからEDC /スルホ-NHS溶液を吸引し、50マイクロリットルの1モルMESバッファーを塗布します。

MESバッファーを吸引し、50マイクロリットルの1x PBSでチップを2回すすぎます。チップからPBSを吸引し、標的分子Hsp90を加えます。ガラスペトリ皿に蓋をし、室温で30分間インキュベートします。次に、標的分子を含む溶液を吸引し、50マイクロリットルの1x PBSで3回すすぎます。

チップから1x PBS溶液を吸引し、50マイクロリットルのQ