JoVE 実験百科事典
生物学的技法
0 回視聴 • 4:43 分 • July 8th, 2025
β-ラクタマーゼベースの導電率バイオセンサーアッセイを開始するには、作用電極、対電極、および参照電極を備えたトランスデューサーチップを使用します。作用電極には導電性ポリマーコーティングが施されており、標的抗原の固定化が容易です。参照電極と対電極には、このポリマーコーティングがありません。
標的抗原を含む溶液をチップに加えます。インキュベート。抗原は、非共有結合相互作用を介して作業電極表面に固定化されます。結合していない抗原を除去するために洗浄します。
ブロックソリューションを追加します。溶液中のタンパク質は、作業電極上の結合していない部位に付着し、それらをブロックします。
二官能性キメラタンパク質をチップに追加して、固定化抗原を検出します。キメラタンパク質は、抗生物質耐性の原因となる細菌タンパク質であるβ-ラクタマーゼ酵素で構成されています。この酵素は、シングルドメイン抗体のN末端可変領域であるナノボディに融合します。
インキュベーション時に、タンパク質のナノボディは固定化された標的抗原に結合します。結合していないキメラタンパク質を除去するために洗浄します。
チップをコンピューター制御のデジタルマルチメーターに接続します。抗生物質ベンジルペニシリン(β-ラクタマーゼの基質)を含む検出溶液を追加します。
ベンジルペニシリンは、抗原結合キメラタンパク質のβ-ラクタマーゼに結合して加水分解され、プロトンの放出を引き起こします。陽子はポリマーの電気コンダクタンスの変化を誘発します。
固定化された標的抗原を使用して、参照電極と作用電極の間のコンダクタンスのリアルタイム差をプロットし、キメラタンパク質との相互作用を確認します。
β-ラクタマーゼベースの導電率バイオセンサーアッセイを開始するには、作用電極、対電極、および参照電極を備えたトランスデューサーチップを使用します。作用電極には導電性ポリマーコーティングが施されており、標的抗原の固定化が容易です。参照電極と対電極には、このポリマーコーティングがありません。
標的抗原を含む溶液をチップに加えます。インキュベート。抗原は、非共有結合相互作用を介して作業電極表面に固定化されます。結合していない抗原を除去するために洗浄します。
ブロックソリューションを追加します。溶液中のタンパク質は、作業電極上の結合していない部位に付着し、それらをブロックします。
二官能性キメラタンパク質をチップに追加して、固定化抗原を検出します。キメラタンパク質は、抗生物質耐性の原因となる細菌タンパク質であるβ-ラクタマーゼ酵素で構成されています。この酵素は、シングルドメイン抗体のN末端可変領域であるナノボディに融合します。
インキュベーション時に、タンパク質のナノボディは固定化された標的抗原に結合します。結合していないキメラタンパク質を除去するために洗浄します。
チップをコンピューター制御のデジタルマルチメーターに接続します。抗生物質ベンジルペニシリン(β-ラクタマーゼの基質)を含む検出溶液を追加します。
ベンジルペニシリンは、抗原結合キメラタンパク質のβ-ラクタマーゼに結合して加水分解され、プロトンの放出を引き起こします。陽子はポリマーの電気コンダクタンスの変化を誘発します。
固定化された標的抗原を使用して、参照電極と作用電極の間のコンダクタンスのリアルタイム差をプロットし、キメラタンパク質との相互作用を確認します。