表面プラズモン共鳴によるセンサーチップを用いた生体分子間相互作用の研究

生体分子相互作用を研究するために表面プラズモン共鳴(SPR)を実行するには、フローセルのSPR検出器上に配置されたセンサーチップから始めます。この金属コーティングされたセンサーチップは、チップ表面にヒドロゲル材料の層が堆積されており、タンパク質の固定化に適しています。

ハイドロゲルと相互作用して表面に固定するウイルスペプチドをチップに重ねます。非特異的なタンパク質相互作用を防ぐアルカリ性急冷溶液で洗浄します。

光をチップに直接照射します。共鳴角では、金属電子がこの光を吸収して共鳴し、対応する反射角で反射光の強度を低下させます。

光検出器はこの反射光を収集し、プロセッサはこの信号をベースラインに変換して、センサーグラム(時間に対するセンサーの応答を表すグラフ)を生成します。

抗ウイルス剤の溶液をフローセルに流します。流れの間、抗ウイルス剤はチップ上の固定化されたウイルスペプチドと相互作用します。この関連により屈折率が変化し、反射光の角度と強度が変化し、最終的にセンサーの応答が生じます。

2つの分子間の相互作用を妨害し、解離を引き起こし、センサーの応答を低下させるイオン強度の高い洗浄バッファーを追加します。

センサーグラムの形状を分析し、生体分子相互作用に重要な2つの分子の会合と解離を評価します。

デュアルチャンネルSPRシステムの場合、HBS-EP+をランニングバッファーとして、再生バッファーとしてpH 1.5〜1.6の10ミリモルグリシン塩酸を使用し、装置の脱気装置、オートサンプラー、およびポンプをオンにします。次に、システム全体を二重蒸留水で1時間洗浄します。

次に、検出器に浸漬油を滴下し、金の薄膜でコーティングされたガラスセンサーチップを、上面にカルボキシメチルデキストランヒドロゲルで官能化したガラスセンサーチップを、3ポートフローセルの下の検出器に直接取り付けます。次に、ハンドリングを下に引いて設定を修正します。

タンパク質配位子をセンサーチップに固定化するには、メニューバーのフォームをクリックし、統合されたSPRAutoLinkソフトウェアのテーブルエディターを実行し て実行テーブルを開きます。次に、使用可能な実行テーブルのリストから BASIC_Immobilization を選択してクリックし、コンピューター画面上の実験手順の手順に従います。

次に、[フォーム]セクションの[サンプルセットエディター]をクリックして、オートサンプラーに配置された2つのラックの試薬リストに入力し、さらに分析します。メニューバーのツールとして[オートサンプラーサンプラーダイレクトコントロール]をクリックして、ラックを前方またはホームに戻し、動作温度として摂氏4度を選択します。

ツール]と[ポンプダイレクトコントロール]をクリックしてポンプを起動して二重蒸留水を注入し、[SPR機器ダイレクトコントロール]をクリックしてデータを記録し、そのたびに新しく表示されるウィンドウで開始します。カップリング試薬を300マイクロリットルのバイアルに入れた後、オートサンプラーラックに入れ、[実行]をクリックして実行テーブルを開始します。

ポンプを毎分25,000マイクロリットルで補充した後の単純なタンパク質間相互作用については、ベースライン調整を30秒間実行します。活性化したチップ表面を1モルのエタノールアミン塩酸塩、pH 8.5で急冷する前に、二重蒸留水で1.5分間ベースライン調整を行います。次に、チューブを液体サンプラーから脱気器に二重蒸留水からHBS-EP+のボトルに切り替えます。

フォームをクリックし、下にスクロールし、この操作モードをクリックして「後処理」に変更します。次に、追加をクリックして、各フローセルのデータプロットフォームで時間の経過とともに生成された結合曲線を選択し、オーバーレイをスクラバーファイルとしてエクスポートします。次に、[ファイル]をクリックしてファイル保存オプションを開き、左右の曲線を整列させ、リガンドチャネルの信号から2番目の参照チャネルの信号を差し引くことで応答曲線を取得します。