免疫磁気ネガティブセレクションによる全血からの単球の単離

0 閲覧数4:27 • July 8th, 2025

免疫磁気陰性選択により全血から白血球の一種である単球を単離するには、抗凝固剤処理されたヒト血液をチューブに入れます。Fc受容体遮断抗体と二重特異性四量体抗体複合体を含む抗体カクテル溶液を追加します。

各抗体複合体は2つのモノクローナル抗体から構成され、1つは白血球や赤血球を含む非単球細胞の細胞表面抗原に特異的な抗体で、もう1つはデキストランに特異的な抗体です。

デキストランでコーティングされた磁気ビーズ溶液を追加します。インキュベート。Fc受容体遮断抗体は、単球のFc受容体に結合し、モノクローナル抗体の非特異的結合を防ぎます。

抗体複合体中のモノクローナル抗体は、非単球細胞上の特定の細胞表面抗原を認識して結合し、単球は標識されません。デキストランでコーティングされた磁気ビーズは、抗体複合体の抗デキストラン抗体に結合し、非単球細胞をビーズに架橋します。

チューブを磁気ホルダーに入れます。高勾配磁場の影響下で、磁気ビーズ架橋細胞がチューブ壁に結合し、単球をチューブの中心に残します。

単球含有溶液をピペットで移動します。新しいチューブに移します。磁気ビーズを追加し、残りの不要な細胞を架橋します。磁場の影響下に置き、単球集団を豊かにします。

単球懸濁液を新しいチューブに移します。懸濁液を遠心分離します。さらなる分析のために、単球をバッファーに再懸濁します。

40 ミリリットルの新鮮なヒト全血を 4 本の 10 ミリリットルの EDTA 真空管に採取した後、滅菌技術を使用して、すべての血液をバイオセーフティ キャビネット内の 1 本の 50 ミリリットルの円錐形プロピレン チューブに移します。選択したヒト単球単離キットの製造元の指示に従って、キットから2ミリリットルの単球分離カクテルを血液チューブに加え、キットから磁気ビーズを30秒間ボルテックスします。

血液に2ミリメートルのビーズを加え、25ミリリットルの血清学的ピペットを使用してビーズを血液と慎重に混合します。室温で5分後、血液を4本の50ミリリットルチューブに均等に分割し、1ミリモルEDTAを添加した30ミリリットルの滅菌PBSを各チューブに加えます。プラスチック製の25ミリリットルの血清学的ピペットで再度混合し、チューブを磁気ホルダーに入れます。

10分後、ピペットを使用して、1ミリリットルを超える赤血球を吸引しないように注意しながら、各チューブの中心から内容物を引き出し、チューブの内容物を4つの新しい50ミリリットルチューブの1つに分注します。ボルテックス磁気ビーズを各チューブにさらに500マイクロリットル追加し、細胞溶液を穏やかに混合します。チューブを磁気ホルダーに5分間戻してから、各チューブの中心から4本の新しい50mmチューブの1つに内容物を慎重に移します。

すべての細胞懸濁液が移されたら、新しい50ミリリットルのチューブをそれぞれマグネットホルダーに5分間入れてから、チューブの内容物を4本の新しい50ミリリットルのチューブの3番目のセットに慎重に移します。次に、遠心分離によって細胞を収集し、計数のために合計10ミリリットルの滅菌PBSに4つの細胞ペレットすべてを再懸濁します。

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最終更新:29 8月 2026