初代単球のin vitro培養とマクロファージへの分化

単球は、感染から保護するためにマクロファージと抗原提示樹状細胞に分化する免疫細胞です。

単球を培養し、in vitroで分化を誘導するには、初代ヒト単球の懸濁液を適切な培地に摂取することから始めます。細胞懸濁液を培養プレートのウェルに加えます。細胞が付着できるように生理学的条件でインキュベートします。

分化誘導サイトカイン(顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)を1つのウェルに追加し、マクロファージコロニー刺激因子(M-CSF)を別のウェルに追加します。適切な期間インキュベートします。

GM-CSFは細胞上のヘテロ二量体受容体に結合し、単球の分化を誘導します。GM-CSF結合は、細胞内シグナル伝達経路の活性化をもたらし、M1マクロファージ様表現型へのプライミングのための遺伝子の発現につながります。

M1様細胞(細胞質の体積が大きい丸みを帯びた細胞)は炎症誘発性があり、感染に対する防御を助けます。

もう一方のウェルでは、M-CSFは単球上のホモ二量体受容体に結合し、細胞の分化を誘導します。M-CSF結合は、GM-CSFとは異なる細胞内シグナル伝達経路の活性化をもたらし、M2マクロファージ様表現型へのプライミングのための遺伝子の発現につながります。

細

長い形状のM2様細胞は抗炎症作用があり、組織のリモデリングと修復機能を示します。

分化したマクロファージ細胞は、さらなる下流アッセイの準備が整います。

カウント後、単離した単球を抗生物質を添加した摂氏37度の無血清RPMI 1640培地の1ミリリットルあたり10〜6番目の細胞で再懸濁し、バイオセーフティキャビネット内の35ミリメートルプレートに1ミリリットルの再懸濁細胞をプレートします。次に、プレートを細胞培養インキュベーターに30〜60分間入れて、細胞がウェルの底に付着するようにします。

M1様表現型を持つマクロファージをプライミングするには、GM-CSFミリリットルあたり25ナノグラムを含む100マイクロリットルのウシ胎児血清を各プレートに加えます。M2様表現型を持つマクロファージをプライミングするには、M-CSFミリリットルあたり50ナノグラムを含む100マイクロリットルのウシ胎児を各プレートに加えます。