ヒトバフィーコートからの末梢血単核細胞の単離

末梢血単核細胞 (PBMC) は、リンパ球、単球、樹状細胞などの特殊な免疫細胞の不均一な集団で構成されています。

PBMCを単離するには、新たに入手したヒトバフィーコートの血液を含むチューブから始めます。バフィーコートの血液には、PBMCと、血漿中に浮遊した多葉核を持つ顆粒球、赤血球、および血小板が含まれています。

バフィーコート懸濁液を、PBMC分離に最適な所望の比密度の密度勾配培地に等量に慎重に重ねます。

遠心分離中、異なる細胞型は、勾配培地に対する細胞密度に基づいて、異なる層に分離します。さらに、密度勾配培地中の多糖類は、赤血球の凝集と沈降を促進します。

密度の高い赤血球と顆粒球はチューブの底に沈殿し、密度が最も低い血漿は最上層を形成します。密度勾配媒体よりも密度が低いPBMCは、プラズマ密度勾配媒体界面で白濁した白い層を形成します。

最上部のプラズマ層を取り除きます。PBMCを含む濁った層を注意深く収集し、無血清培地を含む新しいチューブに移します。遠心分離してPBMCをペレット化します。血小板と残留勾配培地を含む上清を廃棄します。

PBMCを新鮮な培地に再浮遊し、さらなる分析に使用します。

ヒトドナーのバフィーコートからPBMCを単離するには、ピペットを使用して、50ミリリットルのチューブの側面に沿って15ミリリットルの密度勾配培地に15ミリメートルのバフィーコートの血液をゆっくりと重ね、遠心分離によって細胞を分離します。滅菌パスツールピペットを使用して最上部の血漿層を除去し、単核細胞層を新しい50ミリリットルのチューブに慎重に移します。

無

血清RPMI培地を細胞に最終容量50ミリリットルまで添加し、遠心分離する前にチューブを数回静かに反転させます。次に、細胞を20ミリリットルの無血清培地に再懸濁して計数します。