フローサイトメトリーを用いた、さまざまな循環型B細胞集団の細胞ソーティング

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ヒト循環B細胞は、細胞表面受容体に基づいて、CD19陽性ナイーブB細胞、CD19およびCD27陽性メモリーB細胞、CD19、CD27、およびCD38陽性形質芽細胞形質細胞に分類されます。

これらの細胞集団を選別するには、精製されたB細胞懸濁液を取ります。ヒト免疫グロブリンG抗体とインキュベートします。抗体はB細胞のFc受容体を遮断し、非特異的抗体の結合を防ぎます。

CD19、CD27、およびCD38を標的とする蛍光標識抗体を追加します。

抗CD19抗体は、B細胞で遍在的に発現するCD19受容体に結合します。

抗CD27抗体は、メモリーB細胞および形質芽細胞形質細胞に発現するCD27受容体に結合します。

抗CD38抗体は、形質芽細胞形質細胞に発現するCD38受容体に結合します。

死細胞マーカーとして蛍光DNA結合色素を追加します。

死んだ細胞は膜の完全性の喪失を示し、色素の細胞侵入と二本鎖DNAへの結合を可能にします。生細胞は染色されないままです。

心分離して結合していない抗体と色素を除去し、細胞をFACSバッファーに再懸濁します。細胞をストレーナーでろ過して均一な懸濁液を取得し、塊を除去します。

フローサイトメーターを使用して、死んだ細胞と生きた細胞を選別します。生細胞内では、CD19、CD27、およびCD38の発現により、ナイーブB細胞、メモリーB細胞、および形質芽細胞形質細胞が区別されます。

非特異的ブロッキングを実行した後、1 x 106細胞あたり1マイクログラムの各選択抗体をチューブに加え、穏やかに混合して氷上で30分間インキュベートします。インキュベーションの最後の5分間に、5マイクロリットルの7-AADを細胞に加えます。次に、2ミリリットルの新鮮なPBSを細胞に加え、遠心分離する前にボルテックスします。

レットを1〜5 x 10 7細胞/ミリリットル濃度の新鮮な選別バッファーに再懸濁し、40ミクロンのセルストレーナーを介して細胞を新しい5ミリリットルのポリスチレンチューブにろ過します。次に、フローサイトメトリーによって細胞を5ミリリットルの新鮮なRPMI培地を含む3つの15ミリリットルチューブに選別し、ナイーブB細胞、メモリーB細胞、および形質芽細胞形質細胞を収集します。

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Last updated: 4 July 2026