In vitroマウス骨髄間質細胞の脂肪細胞への分化

脂肪細胞、または脂肪貯蔵細胞は、脂肪組織の主要な細胞であり、免疫応答を調節する免疫シグナル伝達分子であるアディポカインを分泌します。

脂肪

細胞をin vitroで作製するには、マウス骨髄間質細胞(BMSC)の接着培養物(未分化多能性細胞)を含むマルチウェルプレートから始めます。

ホ

スホジエステラーゼ酵素阻害剤とデキサメタゾン(合成グルココルチコイド)を含む脂肪細胞誘導培地で細胞を処理し、細胞の分化を引き起こします。

阻害剤は細胞に入り、環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ、環状アデノシン一リン酸(cAMP)の分解に不可欠な酵素を不活性化します。この阻害により、細胞分化に重要な細胞内 cAMP レベルが上昇します。

デキサメタゾンはBMSCの細胞内受容体に結合し、核に入り、脂質の合成と蓄積に関与する遺伝子を活性化します。これにより、BMSCが前脂肪細胞(成熟脂肪細胞の前駆細胞)に分化します。

使用済み培地を新しい誘導培地に交換して、前脂肪細胞を維持します。特定の期間の後、高グルコースとインスリンを含む脂肪細胞塩基培地で細胞を処理します。

インスリンはその特定の細胞表面受容体に結合し、細胞表面のグルコーストランスポーターの転座を活性化し、前脂肪細胞へのグルコースの取り込みを促進します。細胞は過剰なブドウ糖を利用して脂質液滴を合成し、脂肪生成(脂質蓄積のプロセス)を引き起こし、成熟脂肪細胞への分化

を促進します。

細胞を脂質染色色素で処理し、光学顕微鏡で観察します。成熟した脂肪細胞は、複数の赤い脂質滴を持つ丸い細胞として現れます。

骨髄幹細胞脂肪細胞分化を誘導するには、コンフルエント骨髄細胞培養の細胞培養培地を脂肪細胞誘導培地に交換します。培養2日後、上清を新鮮な脂肪細胞誘導培地に置き換え、4日目に脂肪細胞ベースの培地に切り替えます。7日目に、細胞に脂質滴が蓄積していること、表現型の表示が成熟脂肪細胞に類似していることを確認します。