0 閲覧数 • 3:25 分 • July 8th, 2025
ナイーブT細胞と抗原提示細胞APC間の複数の細胞表面受容体-リガンド相互作用は、T細胞の活性化と増殖を誘発します。
このプロセスの2つの主要なイベントには、CD3-T細胞受容体複合体によるAPC発現抗原の認識と、それに続くAPC発現B7リガンドとT細胞受容体CD28の間の相互作用が含まれます。
T細胞の活性化と増殖をin vitroで研究するには、ヒト末梢血単核細胞(PBMC)を適切な培地に懸濁して取ります。抗CD3抗体と抗CD28抗体でコーティングされた磁気ビーズを加え、細胞を2つの円錐形のチューブに分割します。
サイトカインインターロイキン-2、IL-2を最初のチューブに追加し、インターロイキン-15、IL-15をもう一方のチューブに追加します。細胞をマルチウェルプレートに移します。インキュベート。
ビーズの抗CD3抗体と抗CD28抗体は、それぞれT細胞に発現するCD3-T細胞受容体複合体とCD28受容体に結合し、T細胞の活性化と増殖を引き起こします。
IL-2では、サイトカインが活性化されたT細胞表面の受容体に結合し、エフェクターT細胞に分化・増殖します。逆に、IL-15は主にT細胞の分化とメモリーT細胞への増殖を促進します。
細胞の半分を再懸濁して新しいウェルに移し、細胞の増殖を可能にします。IL-2またはIL-15を含む新鮮な培地を加えて、その後の分析のためにサイトカイン分化したT細胞集団を維持します。
まず、100万細胞あたり12.5マイクロリットルのビーズを微量遠心チューブに移し、チューブ内のビーズ12.5マイクロリットルあたり12.5マイクロリットルのPBSを加えて、CD3/CD28ビーズを洗浄します。次に、微量遠心チューブを適切な磁石の上に1分間置き、バッファーを廃棄し、ビーズを元の容量のT細胞培地に再懸濁します。
次に、100万個の細胞あたり12.5マイクロリットルのビーズを1〜2ビーズの比率で加え、細胞をそれぞれ約500万個の細胞で2つの条件に分割します。次に、各条件に適切な量のサイトカインを追加し、細胞をマルチウェルプレートに移します。細胞を摂氏37度、二酸化炭素5%で3日間インキュベートします。
3日間のインキュベーション後、サイトカインの2倍の濃度で新鮮なT細胞培地を調製します。各ウェルから新しいウェルに体積の半分を移すことにより、細胞を再懸濁して分割します。次に、同量の新たに調製したT細胞培地を各ウェルに加えます。
本研究では、抗原提示細胞(APC)との受容体-リガンド相互作用を介したT細胞の活性化および増殖について調査します。手法としては、ヒト末梢血単核細胞(PBMC)を培養し、特定の抗体およびサイトカインを用いてT細胞応答を促進させます。
末梢血単核球(PBMC)由来のヒトT細胞をex vivoで強力に活性化および分化させることは、免疫学に基づく創薬およびトランスレーショナルリサーチの基盤となります。本プロトコルは、エフェクターT細胞およびメモリーT細胞集団の標準化された作製を可能にし、初期段階のターゲットバリデーションおよび機能的スクリーニングにおける予測精度を向上させます。信頼性の高いT細胞培養システムは、免疫調節戦略のリスク低減および免疫療法パイプラインにおけるポートフォリオ決定を推進する上で極めて重要です。
このT細胞培養プロトコルは、初期探索から前臨床までの連続的なプロセスに組み込まれており、免疫応答の仮説検証、スクリーニング、およびトランスレーショナルモデリングを可能にします。
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最終更新:29 8月 2026