ヒト末梢血単核細胞からの活性化T細胞の培養

ナイーブT細胞と抗原提示細胞APC間の複数の細胞表面受容体-リガンド相互作用は、T細胞の活性化と増殖を誘発します。

このプロセスの2つの主要なイベントには、CD3-T細胞受容体複合体によるAPC発現抗原の認識と、それに続くAPC発現B7リガンドとT細胞受容体CD28の間の相互作用が含まれます。

T細胞の活性化と増殖をin vitroで研究するには、ヒト末梢血単核細胞(PBMC)を適切な培地に懸濁して取ります。抗CD3抗体と抗CD28抗体でコーティングされた磁気ビーズを加え、細胞を2つの円錐形のチューブに分割します。

サイトカインインターロイキン-2、IL-2を最初のチューブに追加し、インターロイキン-15、IL-15をもう一方のチューブに追加します。細胞をマルチウェルプレートに移します。インキュベート。

ビーズの抗CD3抗体と抗CD28抗体は、それぞれT細胞に発現するCD3-T細胞受容体複合体とCD28受容体に結合し、T細胞の活性化と増殖を引き起こします。

IL-2では、サイトカインが活性化されたT細胞表面の受容体に結合し、エフェクターT細胞に分化・増殖します。逆に、IL-15は主にT細胞の分化とメモリーT細胞への増殖を促進します。

細胞の半分を再懸濁して新しいウェルに移し、細胞の増殖を可能にします。IL-2またはIL-15を含む新鮮な培地を加えて、その後の分析のためにサイトカイン分化したT細胞集団を維持します。

まず、100万細胞あたり12.5マイクロリットルのビーズを微量遠心チューブに移し、チューブ内のビーズ12.5マイクロリットルあたり12.5マイクロリットルのPBSを加えて、CD3/CD28ビーズを洗浄します。次に、微量遠心チューブを適切な磁石の上に1分間置き、バッファーを廃棄し、ビーズを元の容量のT細胞培地に再懸濁します。

次に、100万個の細胞あたり12.5マイクロリットルのビーズを1〜2ビーズの比率で加え、細胞をそれぞれ約500万個の細胞で2つの条件に分割します。次に、各条件に適切な量のサイトカインを追加し、細胞をマルチウェルプレートに移します。細胞を摂氏37度、二酸化炭素5%で3日間インキュベートします。

3日間のインキュベーション後、サイトカインの2倍の濃度で新鮮なT細胞培地を調製します。各ウェルから新しいウェルに体積の半分を移すことにより、細胞を再懸濁して分割します。次に、同量の新たに調製したT細胞培地を各ウェルに加えます。