ヘルパーT細胞と抗原提示細胞との間の免疫学的シナプス形成

免疫細胞は複数の受容体の相互作用を介して相互に通信し、特殊な接合部、つまり免疫シナプスを形成します。このシナプスは、免疫応答に不可欠なシグナル伝達分子を交換するための部位として機能します。

免疫学的シナプス形成をin vitroで研究するには、活性化されたヒト抗原提示細胞(APC)の接着培養を含む基底マトリックスコーティングマイクロウェルスライドから始めます。

活性化されたAPCは、T細胞の活性化に不可欠な主要な組織適合性複合体またはMHC-II分子に結合した抗原をその表面に提示します。これらの細胞は、簡単に識別できるように青色蛍光色素で標識されています。

組

換えヒトヘルパーTリンパ球でウェルを処理します。これらのヘルパーTリンパ球は、緑色の蛍光タンパク質タグ付き膜タンパク質(分泌小胞に見られるCD63)を発現します。これにより、分泌小胞の追跡が可能になります。

リンパ球のT細胞受容体は、APC上のMHC-抗原複合体と相互作用し、ヘルパーTリンパ球を抗原提示細胞に近づけ、結合を引き起こします。

接合すると、APC上の共刺激シグナル伝達分子がリンパ球受容体と相互作用し、接合部位の周囲にクラスターを形成し、免疫学的シナプスを作成します。

シナプスの形成は、細胞骨格要素(アクチンフィラメントと微小管)の再配置を伴うリンパ球細胞骨格の再編成を引き起こします。この再編成により、APC近くのシナプスへの小胞の移動が促進されます。

蛍光顕微鏡で細胞を観察します。ヘルパーT細胞内の緑色の小胞が青色のAPCに向かう動きを記録し、免疫学的シナプス形成を確認します。

細胞トラッカー、青色標識ブドウ球菌エンテロトキシンEパルス付着ラジ細胞を含むチャンバースライドをインキュベーターから取り出します。ピペットをウェルの隅に置き、各ウェルから培地を1つずつ慎重に吸引します。

すぐに

培地を細胞培養培地中の200マイクロリットルの再懸濁Jurkat細胞と交換します。タイムラプスを撮影する場合は、すぐに顕微鏡に進

みます。

顕微鏡ステージインキュベーターのチャンバースライドを見つけ、いくつかの適切なフィールドを選択します。

イメージングの前に、顕微鏡をインキュベーションチャンバーで準備します。Jurkat細胞をRaji細胞を含む各ウェルに追加した後、予熱した顕微鏡ステージインキュベーター上のマイクロウェルチャンバースライドをすばやく見つけ、いくつかのXY位置を選択します。

エンドポイント実験のみが計画されている場合は、チャンバースライドを摂氏37度で5%の二酸化炭素とともに1〜2時間インキュベートします。培養期間の後、テキストプロトコルに概説されているように、抱合体の形成を確認し、その後抱合体を固定します。